摘要: 蜕皮激素(20-hydroxyecdysone, 20E)是调控昆虫发育的重要激素，在昆虫的蜕皮和变态中起关键作用。近年来的研究表明，20E也调控昆虫抗菌肽的表达，揭示昆虫的发育和免疫之间具有重要的联系。家蚕是重要的经济昆虫，家蚕抗菌肽对蜕皮激素(20E)的应答及其调控机制仍有待研究。本文利用20E注射家蚕5龄第3天幼虫，qRT-PCR结果表明20E处理的脂肪体中抗菌肽CecropinB6基因(BmCecB6)的表达上调。通过对抗菌肽BmCecB6上游启动子的截短和双荧光素酶活性分析，结果显示BmCecB6响应20E的调控位点在启动子-448～-170区域，该区域内存在潜在的FoxO、E74A和BR-C等结合位点。本研究表明20E抑制了ILS通路水平，暗示ILS下游的转录因子FoxO被激活。进一步对BmCecB6的启动子进行FoxO结合位点的缺失突变，双荧光素酶检测结果表明20E对BmCecB6的诱导活性并没有丧失，推测BmCecB6对20E的应答不是通过转录因子FoxO结合BmCecB6启动子中的顺式调控元件直接调控的。20E激活BmCecB6表达的分子调控机制还需要进一步深入研究。

摘要: 滞育(Diapause)是昆虫发育停滞或减缓的生理状态，家蚕Bombyx mori作为卵滞育的代表，其滞育过程已得到广泛研究，但诱导滞育发生的分子机制尚不清楚。二化性家蚕滞育性由遗传和母系在胚胎期所处的环境条件决定，25℃催青蚕卵孵化后的家蚕产滞育卵，15℃低温催青则诱导家蚕产下非滞育卵。本研究分别用25℃和15℃催青蚕卵，在发生滞育诱导的温度敏感期取样，抽提蛋白质通过非标(Label-free)蛋白质组定量技术进行质谱测序。筛选出具有明显表达差异的蛋白104个，其中56个蛋白上调，48个蛋白下调。通过生物信息学对差异蛋白进行GO分类和KEGG功能富集分析，结果显示差异蛋白主要参与生长发育、物质代谢和胁迫应答等生物过程；同时差异蛋白主要参与胰岛素信号通路、乙醛酸和二羧酸代谢等相关途径。分别选取上调基因和下调基因进行qRT-PCR验证，其趋势与蛋白组学结果一致。该研究将为进一步解析家蚕滞育诱导发生机制提供靶标蛋白和数据参考。

摘要: 家蚕微粒子病是家蚕Bombyx mori的重要病害，探索其消毒杀灭方法对蚕业生产具有重要意义。本研究采用微粒子染色法和添食家蚕侵染法测试了温度、紫外线和消毒剂处理10~8个/mL家蚕微粒子后对家蚕微粒子的消杀作用，结果表明：温度对家蚕微粒子虫灭活温度为60℃处理30 min以上；使用20 wx功率紫外灯距离50 cm照射12 min及以上时，微粒子死亡率为47.70%,对家蚕侵染率为0;三氯异氰脲酸800 mg/L及以上浓度处理6 min以上家蚕微粒子死亡率为100%,对家蚕的侵染率为0;戊二醛癸甲溴铵200 mg/L及以上浓度处理6 min以上家蚕微粒子死亡率为100%,对家蚕的侵染率为0。3种消毒方法中温度法主要用于小型蚕具消杀微粒子；紫外线用于蚕业辅助设施的表面微粒子的消杀；三氯异氰脲酸和戊二醛癸甲溴铵均表现出较好的消杀效果，其中戊二醛癸甲溴铵较含氯的消毒剂三氯异氰脲酸稳定性强，刺激性小，对养蚕的金属腐蚀性小，可作为含氯消毒剂的部分替代使用。本研究结果可为蚕业生产中消杀微粒子提供参考。

摘要: BmSQD(Bombyx mori SQUID)是一种具有RRM结构域(RNA recognition motif, RRM)的核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins, hnRNPs)。为探究SQD在家蚕中的表达定位和功能，在生物信息学分析和克隆表达与抗体制备的基础上，本文通过对变态发育和胚胎发育时期部分组织的BmSQD蛋白水平和mRNA水平表达量进行分析，辅以组织细胞定位的免疫组化分析，对SQD蛋白的基本特性和在家蚕Bombyx mori中的表达定位及功能进行了研究。生物信息学分析显示，昆虫中的SQD同源基因相似性高，尤其是SQD蛋白二级结构的α螺旋和β折叠按照β1-α1-β2-β3-α2-β4的空间顺序组合形成的两个RRM结构域在昆虫中高度保守；BmSQD是一种亲水性且具有特定空间结构的hnRNPs蛋白，存在潜在的磷酸化位点；BmSQD在家蚕中的大部分组织中都有表达，尤其在卵巢与精巢等重要组织，且主要在家蚕发育的重要时期如胚胎发育与变态发育时期高表达，主要定位在细胞核内，对基因转录后调节起到剪接调控作用。本文为研究SQD蛋白在昆虫变态发育和胚胎发育中的剪接调控机制提供数据参考的意义。

摘要: 为克隆家蚕Bombyx mori Piwi亚家族蛋白基因cDNA全长序列，分析其分子特征和表达模式，探究Piwi亚家族蛋白在家蚕中的生理功能，本研究利用已知物种的Piwi亚家族蛋白搜索家蚕基因组，预测获得家蚕Piwi亚家族蛋白基因siwi1和siwi2,采用RACE技术克隆siwi1和siwi2的全长cDNA序列，利用ORFfinder、Gene-Explorer、InterPro等分析其分子特征；其次，利用已知的所有物种Piwi蛋白及其类似物Piwil构建系统发育树；最后，通过荧光定量PCR技术检测了siwi1和siwi2在丝腺、马氏管、中肠、头部、卵巢和精巢以及不同发育时期(卵、1～5龄幼虫、蛹、成虫)的表达水平，结果显示，克隆获得了siwi1 cDNA全长3 277 bp,包含部分5′UTR、完整的开放阅读框ORF和3′UTR,获得了siwi2的部分序列，其中siwi1对应BmPiwi,siwi2对应BmAgo3。系统发育结果显示，家蚕Piwi亚家族蛋白与乳草长蝽Oncopeltus fasciatus、黑腹果蝇Drosophila melanogaster、橘小实蝇Bactrocera dorsalis、优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa、斯氏按蚊Anopheles stephensi、褐飞虱Nilaparvata lugens的PIWI蛋白以及东亚飞蝗Locusta migratoria的PIWI2和PIWI3蛋白亲缘关系最近，和三疣梭子蟹Portunus trituberculatus的PIWI2和PIWI3同为一支。家蚕AGO3蛋白与小菜蛾Plutella xylostella的AGO3亲缘关系最近，与西方玉米根虫Diabrotica virgifera virgifera、白蜡窄吉丁Agrilus planipennis的AGO3及东亚飞蝗Locusta migratoria的PIWI1同属一支，与橘小实蝇Bactrocera dorsalis的AGO3同属一总支。组织表达结果表明BmPiwi在精巢表达水平显著高于其他组织，其次是卵巢及头部，而BmAgo3在头部表达水平显著高于其他组织。BmPiwi和BmAgo3在卵期表达量最高，但在初孵幼虫中表达量迅速下降，并在整个幼虫时期都维持低表达状态，直至蛹期开始表达量出现大幅回升，并维持高水平表达至成虫期。本研究发现BmPiwi和BmAgo3在家蚕中的表达具有明显的时空特异性，在生殖组织以及需要进行大量细胞活动的时期，家蚕Piwi亚家族蛋白基因的表达均发生了明显的变化，为进一步探测家蚕Piwi亚家族的生理功能提供了研究方向和理论基础。