摘要: 羧酸酯酶是一个多功能超家族酶类,为研究羧酸酯酶基因在家蚕Bombyxmori组织中的功能,利用5′/3′RACE和RT-PCR方法克隆了一个家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-9,其GenBank登录号为EU523534。该基因含有一个1 680 bp的ORF,编码559个氨基酸。BmCarE-9预测的分子量64.2 kD,等电点7.13,结构分析表明BmCarE-9存在一个类似的催化三联体,其中两个残基发生改变。利用实时荧光定量PCR方法研究了该基因在家蚕5龄第3天幼虫不同组织以及在5龄期各日龄幼虫丝腺组织中的表达水平。结果表明,该基因在丝腺中特异性高表达,且主要在中部和后部丝腺中表达。该基因在5龄期随着丝腺的生长发育表达量逐渐增高,到末期表达水平逐渐降低。据此推测该基因可能与丝腺的生长发育或丝蛋白的合成相关。

摘要: 为探讨家蚕Bombyxmori蛾触角发生发育、结构与功能的分子基础和调控机制,我们采用双向电泳结合基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)技术初步探讨了家蚕蛾触角蛋白及其雌雄表达差异。采用ImageMast 6.0软件分析电泳图谱,在家蚕蛾触角中检测到约550个蛋白点,主要集中在分子量1470 kD,等电点48之间。从雌雄蛾触角电泳图谱中分别检测到419和489个蛋白点,其中雌雄匹配蛋白点有326对,匹配率为71.81%。雌雄间表达差异点有34个,雌雄分别所特有的特异蛋白点分别为9和20个。对特异和差异点进行MALDI-TOF/MS鉴定获得其中5种蛋白——成虫原基生长因子(imaginal disk growth factor)、表皮蛋白RR-1基序15(cuticular protein RR-1 motif15)、硫醇过氧化还原酶(thiol peroxiredoxin)、空泡ATP酶B亚基(vacuolar ATPase B subunit)以及gasp前体(gaspprecursor),它们在雄蛾触角中表达量都比雌蛾高。这为家蚕触角蛋白的进一步研究提供了基本信息。

摘要: 为探索细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi技术是否在家蚕Bombyx mori可行,本研究引入了在其他物种中广泛应用的细菌表达dsRNA的RNAi系统:HT115细菌株和L4440质粒。利用L4440载体两端含有T7启动子的特点,设计并构建了针对家蚕核受体FTZ-F1基因的RNA干扰(RNA interference)载体,将构建好的质粒转入大肠杆菌Escherichia coliHT115,在IPTG诱导下成功获得目标基因对应双链RNA(dsRNA)。结果显示:通过对5龄第7天家蚕幼虫注射IPTG诱导后提取的FTZ-F1基因对应的dsRNA25μg,85%的蛹变态发育过程明显延迟,不能实现幼虫到蛹的形态完全转变。荧光定量PCR分析显示目标基因的表达得到了特异的抑制。实验结果初步表明,通过细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi策略,以其经济、高效的特点,具有广泛应用于家蚕基因功能研究中的潜力。

摘要: 为探讨柘叶Cudrania tricuspidata饲养家蚕Bombyx mori易感染核多角体病毒(BmNPV)的机制,本实验比较研究了分别以柘叶和桑叶Morus alba饲养家蚕后其消化液中抗病毒蛋白活性的差异。结果表明:家蚕经柘叶饲养后消化液中红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的强度无明显变化,但柘叶饲养蚕消化液中脂肪酶、胰蛋白酶的活性显著低于桑叶饲养蚕,柘叶饲养蚕消化液中脂肪酶和胰蛋白酶的活性分别为1421.71±202.60U/L和19.67±8.17U/mL,桑叶饲养蚕脂肪酶和胰蛋白酶的活性分别为1976.03±139.92U/L和199.18±181.71U/mL。这些结果说明,消化液中脂肪酶和胰蛋白酶的活性水平低与柘叶饲养蚕易感染核型多角体病毒(BmNPV)可能相关。

摘要: 转基因家蚕Bombyxmori是指利用分子生物学手段,将外源基因转移到家蚕染色体中,使之出现先前不具有的性状和产物,并且可以保持传代,在个体水平可以体现外源基因的功能,使外源基因获得大量表达。目前转基因家蚕研究主要以piggyBac转座系统为常用载体,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因为常用报告基因,经显微注射法获得转基因家蚕的成功率可达40%。通过转基因家蚕技术已经探明了家蚕外源导入核受体基因BmFtz-F1,调控家蚕体壁半透明的BmBLOS2基因、蜕皮启动激素(ecdysis-triggering hormone,ETH)基因以及家蚕抗菌肽CecB(cecropin B)基因的功能;获得了具有高品质、高细纤度、高拉伸强度和高弹性丝品种,能吐带绿色荧光或粉红色荧光的蚕丝品种,抗家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)品种及抗藤黄微球菌的品种;成功表达纯化了人的Ⅲ型前胶原蛋白、人碱性纤维生长因子、人血清蛋白、人脑源性神经营养因子、人胰岛素生长因子Ⅰ、猫干扰素、单克隆抗体等生物活性蛋白、疫苗及特殊的生物材料。随着家蚕转基因技术的深入研究,转基因家蚕产物将在国防、军工、航天、医药等方面有着更为广阔的应用前景。