摘要: 家蚕Bombyxmori是卵滞育的昆虫,在滞育期间无形态变化,也不存在器官发育和组织分化,然而其生理代谢过程仍在进行。为进一步研究家蚕滞育的机制,本研究测定了家蚕滞育卵、即时浸酸处理的滞育卵及非滞育卵在胚胎发育过程中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)、过氧化氢酶(catalase,CAT,EC1.11.1.6)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK,EC2.7.1.40)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AchE,EC3.1.1.7)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH,EC1.1.1.28)的活性变化。结果表明:处理后1-7d,即时浸酸处理的滞育卵,SOD活性由56517.00U/g提高到81986.94U/g,CAT活性由14.98U/g提高到106.90U/g,PK活性由25.19U/g提高到181.70U/g,AChE活性由17.88U/g提高到287.86U/g,而LDH活性由169.96U/g下降到122.82U/g。而在非滞育卵中,SOD活性由86417.99U/g下降到66024.19U/g,LDH活性由169.07U/g下降到135.02U/g;CAT活性由1.47U/g提高到44.37U/g,PK活性由20.56U/g提高到92.09U/g,AChE活性由21.40U/g提高到99.17U/g。在滞育卵中,SOD和AChE活性较稳定;CAT活性随发育上升,而LDH活性随发育而下降;PK活性在胚胎发育的前4d呈上升趋势,随后基本保持稳定。通过了解家蚕滞育卵、非滞育卵与即时浸酸卵的相关酶活性在胚胎发育过程中存在的变化,有助于进一步揭示家蚕滞育的机理。

摘要: 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBRGreen法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。

摘要: 转座子是真核生物基因组的重要组成成分。为了研究家蚕Bombyx mori长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)逆转录转座子的分类及进化,本研究采用denovo预测和同源性搜索相结合的方法,在家蚕基因组中共鉴定出了38个LTR逆转录转座子家族,序列长度占整个基因组的0.64%,远小于先前预测的11.8%,其中有6个家族为本研究的新发现。38个家族中,26个家族有表达序列标签(expression sequencetag,EST)证据,表明这些家族具有潜在的活性。对有EST证据的6个家族和没有EST证据的5个家族用RT-PCR进行了组织表达谱实验,结果表明这11个家族在一些组织中有表达,这进一步证实了这些家族具有转录活性,基于此我们推测家蚕中大部分的LTR逆转录转座子家族很可能具有潜在活性。对转座子的插入时间进行估计,结果表明绝大部分元件都是最近1百万年内插入到家蚕基因组中的。我们还比较了黑腹果蝇Drosophila melanogaster、冈比亚按蚊Anopheles gambiae和家蚕B.mori中Ty3/Gypsy超家族分支的差异,结果表明不同枝在不同昆虫中有着不同的扩张。家蚕中LTR逆转录转座子的鉴定和系统分析有助于我们理解逆转录转座子在昆虫进化中的作用。

摘要: 【目的】研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine5'-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响。【方法】用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111(AAA)突变为Glu(GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC);构建重组表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,经亲和纯化后进行酶活鉴定。【结果】重组蛋白的分子量约为45.0kDa。体外酶活分析发现,家蚕氨基酸残基Lys111突变体K111E活性降低了约78.0%,Ser160突变体S160A的活性降低了67.4%。【结论】结果提示氨基酸残基Lys111和Ser160对维持家蚕PNPO的酶活性有重要作用。本研究明确了家蚕磷酸吡哆醇氧化酶个别保守氨基酸残基的酶学功能。

摘要: 【目的】了解家蚕Bombyx mori维生素B6关键代谢酶吡哆醛激酶(pyridoxal kinase,PLK)在家蚕不同组织间的表达差异。【方法】原核表达家蚕重组PLK,获得目的蛋白制备多克隆抗体,利用Western blot方法对PLK在家蚕不同发育时期、5龄第3天幼虫不同组织及5龄不同日龄幼虫表皮、头部和马氏管中的表达进行分析;并采用实时荧光定量PCR的方法对PLK基因在家蚕不同组织中的mRNA转录水平进行比较。【结果】PLK在家蚕5龄幼虫的表达水平最高,在5龄第3天幼虫各组织中的表达由高到低依次为:精巢、马氏管、表皮、中肠、头部、卵巢、脂肪体、丝腺;5龄期不同日龄幼虫表皮组织的表达差异最大,头部和马氏管中均为前期表达量稍高于后期。在转录水平方面,精巢的表达量最高,其次是马氏管和头部。【结论】PLK在家蚕不同发育时期及组织中的差异表达进一步证实PLK在家蚕VB6代谢中的生物学功能的重要性。