摘要: 采用基于16S rDNA的变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)和16S rDNA文库序列分析的手段,研究了重要经济昆虫家蚕Bombyxmori2个品系——专食性品系C108和广食性品系SCN2幼虫中肠内的细菌群落多样性,同时还探讨了食料对家蚕中肠内细菌群落结构的影响。文库序列分析表明,PCR扩增得到的16S rDNA基因代表了家蚕中肠内的41种细菌系统发育型(phylotype),大多数属于Proteobacteria,其次是Lactobacillales。此外,还有少数属于Deinococcus-Thermus、Bacillales、Clostridiales和Actinobacteria,尚有5种系统发育型不能确定其所属类型。家蚕的这2个品系中,肠球菌属Enterococcus是其中肠细菌的优势菌群,栖热菌属Thermus是次优势菌群。优势菌肠球菌属的组成在品系和不同食料喂养条件下有着一定的变化,无桑饲料喂养条件下SCN2品系中肠内还出现了新的次优势菌葡萄球菌(Staphylococcus)。DGGE图谱显示家蚕低龄幼虫和高龄幼虫肠道细菌格局存在差异,推测可能与其发育期生理状态的差异有关。本研究结果提示家蚕肠道特殊菌群的出现可能与其特殊的食性有一定的关系,食料改变、生长受阻后肠道微生态平衡也发生变化。

摘要: 为了研究家蚕Bombyx mori造血器官机能障碍后其血淋巴中蛋白质成分的变化,利用重离子射线局部照射家蚕幼虫的造血器官,检测了照射后家蚕血淋巴中的蛋白质成分及注射大肠杆菌后在体内诱导出现的应急蛋白量的变化。结果表明,照射蚕血淋巴中的蛋白质含量与对照蚕之间没有明显的差异。但在成分分析时发现,5龄起蚕血淋巴中70kD附近的3条蛋白质谱带比对照蚕的浓度要高,随着个体的发育两者的浓度都上升;5龄后期则相反,对照蚕的浓度比照射蚕高;脂肪体中贮藏蛋白质的含量具有相似的变化趋势。用家蚕贮藏蛋白质SP-1及SP-2的抗血清进行免疫印迹反应的结果显示:70kD附近的3条蛋白质谱带的最上面的一条为贮藏蛋白质SP-1,下面的二条为贮藏蛋白质SP-2;同时照射蚕血淋巴中分子量约为24kD的蛋白质成分也发生变化,5龄前期的浓度比对照蚕低,5龄第3天几乎检测不到;全体照射与造血器官局部照射蚕之间的结果相似。照射蚕注射大肠杆菌后在体内诱导出现的应急蛋白量明显比对照蚕要少。由此认为家蚕幼虫造血器官与血淋巴中的蛋白质成分有关,造血器官的机能障碍、血球的数量减少可影响脂肪体中蛋白质的合成,从而使存在于血淋巴中的蛋白质成分发生变化。

摘要: 即时浸酸在阻止家蚕Bombyx mori卵滞育发动的同时,提高了其呼吸耗氧量,抑制了山梨醇积累。本研究利用HPLC法测定了家蚕滞育卵和5min即时浸酸滞育性卵中辅酶Ⅰ和Ⅱ含量。结果表明:产下后24-72h,家蚕滞育卵中NAD,NADH,NADP和NADPH含量分别下降了30%,37%,50%和4%;而即时浸酸滞育性卵中分别增加了77%,46%,142%和241%。不过,即时浸酸并未显著改变滞育性家蚕卵中NADH/NAD和NADPH/NADP比值。据此推测,即时浸酸提高滞育性家蚕卵辅酶Ⅰ含量与其呼吸耗氧量增加有关;即时浸酸显著提高辅酶Ⅱ含量与山梨醇积累抑制无关,而主要与生物合成加强有关。

摘要: 昆虫变态发育过程中,蜕皮激素通过一系列的激素相关转录因子进行信号的转导和放大,从而完成对生长变态发育的调控,其中蜕皮激素受体(EcR)及转录因子BR-C和E74A可能作为早期因子发挥作用。为了研究这3个早期转录因子在鳞翅目昆虫中的功能,本研究采用体外合成dsRNA的方法,将合成的dsRNA分别注射熟蚕期的家蚕Bombyx mori,进行RNA干扰,并对这3个基因被RNA干扰后的形态变化和相关的转录因子基因BmHR3A,BmHR39,BmβFTZ-F1,BmE74B和BmE75B的表达进行了实时荧光定量PCR检测。形态学观察结果显示,这3个基因被RNAi后出现异常的蛹和蛾、小翅和死蛹等表型。qPCR检测结果表明:RNAi BmEcR后导致了BmE74A,BmE74B,BmHR3A和BmβFTZ-F1表达水平的显著降低(P<0.05),RNAi BmE74A后导致了BmEcR,BmBR-C,BmE74B,BmHR3A和BmβFTZ-F1表达水平的显著降低(P<0.01),而RNAi BmBR-C后则导致所有被检测的蜕皮激素受体及其相关转录因子的mRNA水平都显著降低(P<0.01)。据此推测,BmBR-C可能在蜕皮激素信号的早期发挥作用,并对其他相关转录因子和蜕皮激素受体有调控作用。

摘要: 为了探究家蚕Bombyx mori EST-SSR标记的多态性,对检索获得的家蚕第12连锁群的4465条EST序列进行了分析,整理和拼接后得到581条非冗余EST序列,总长度约为480kb。其中,有122条序列中共检测到154个EST-SSR,占所研究的EST序列的2.73%,平均每3.12kb含有一个EST-SSR。在所检测的EST-SSR中,三核苷酸和四核苷酸重复是主导类型,分别占总数的36.36%和28.57%,大部分表现为Perfect形式;核苷酸重复平均长度约为16.2bp,最长为30bp。进一步进行同源性分析,发现有26条序列可以在NCBI中检索到同源序列,在这些序列中一共含有40个SSR,其中14个(35.0%)位于5'-UTR,11个(27.5%)位于3'-UTR,15个(37.5%)位于CDS区。根据筛选到的微卫星序列设计11对引物,其中8对引物有扩增产物,且条带清晰;应用引物ES1204对8个家蚕品种进行PCR扩增都呈现多态性。结果说明通过家蚕EST数据库发掘SSR标记是一条可行的途径。