摘要: 从感病的柞蚕Antheraeapernyi蛹中分离纯化柞蚕核型多角体病毒(ApNPV),提取基因组DNA,分别构建ApNPVDNA的HindⅢ和SalⅠ酶切片段文库。对基因文库中1个克隆进行序列分析,得到1个长度为321bp的序列,其中包含一个编码76个氨基酸的开放阅读框,预测的分子量为8.46kD,系泛素类似基因。在读码框的上游调控序列中,具有典型的晚期基因启动子序列ataag。氨基酸序列同源性分析结果表明,ApNPV与黄杉毒蛾Orgyiapseudotsugata核型多角体病毒(OpNPV)的同源性最高(96.1%),与苜蓿尺蠖Autographacalifornica核型多角体病毒(AcNPV)的同源性为86.8%,与棉褐带卷蛾Adoxophyesorana颗粒体病毒(AoGV)的同源性最低(71.1%),但与人类、线虫和酵母的泛素同源性分别为77.6%、76.3%和76.3%。一些氨基酸残基在真核生物中保守,在杆状病毒中不保守,个别氨基酸残基是杆状病毒所特有的,这些氨基酸序列的改变对杆状病毒泛素基因的作用有待进一步研究。

摘要: 采用实时定量PCR技术,以家蚕Bombyxmori第11号染色体上的DH-PBAN基因为参照基因,检测家蚕不同个体间BmTpi基因与常染色体上DH-PBAN基因的拷贝数之比,雄体BmTpi∶DH-PBAN=1.0,雌体BmTpi∶DH-PBAN=0.5;并用已经定位于Z染色体上的BmKettin基因为参照,检测BmTpi基因的拷贝数与BmKettin基因的拷贝数之比,雄体BmTpi∶BmKettin=1.0,雌体BmTpi∶BmKettin=1.0,证明BmTpi基因在家蚕基因组中的拷贝数与BmKettin基因相同,说明BmTpi基因位于Z染色体上。

摘要: 采用蛋白质双向电泳技术分析了家蚕Bombyxmori催青后期胚胎蛋白质图谱的变化。研究发现:在头胸分化期(戊3)、反转期(己1)、毛瘤发生期(己2)、点青期(己3)、转青期(己4)和孵化期(己5)胚胎蛋白质的双向电泳图谱中共检测到209个特异蛋白斑点,其中己3和己4两个胚胎出现的特异蛋白斑点数在整个催青期胚胎中为最多,分别达55和77个。与催青前期胚胎出现的特异蛋白斑点变化规律相似,这些特异蛋白斑点大多也是在随后邻近的胚胎发育中消失。推测这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。

摘要: 利用形态学观察方法、分子生物学检测方法以及20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone)和放线菌酮(cycloheximide)体外培养方法,研究了家蚕Bombyxmori蛹变态期丝腺组织的退化与细胞凋亡特征。显微镜的观察显示家蚕丝腺的逐渐退化发生在吐丝期间。DNA梯度电泳的分析表明程序性细胞死亡(programmedcelldeath)可能伴随发生在丝腺的退化过程中。在离体培养条件下,用20_羟基蜕皮酮处理5龄第6天幼虫的丝腺,导致的细胞凋亡提前于对照,提示在进入蛹变态期前,20-羟基蜕皮酮提早激发了介导家蚕丝腺细胞凋亡与水解机制的遗传调控级联系统。上述结果表明,20-羟基蜕皮酮能够诱导家蚕丝腺组织在蛹变态期发生程序性细胞死亡。

摘要: 通过荧光差异显示技术,分析了家蚕Bombyxmori对BmNPV抗性品系NB、感性品系306和近等基因系306NNZZ添毒和未添毒处理区的基因表达的差异。根据差异显示的结果克隆了一条702bp长度的cDNA片段,并用Northernblot进行了验证。该序列经过NCBIEST库的同源性比较获得了电子延伸。延伸后的序列用特异引物进行RT_PCR扩增获得了一条782bp的序列,拼接后基因cDNA序列全长为827bp,推导的氨基酸序列与草地夜蛾SpodopterafrugiperdaS3A同源性最高达97.7%;其次是烟芽夜蛾HeliothisvirescensS3A,同源性为94.0%;与黑腹果蝇DrosophilamelanogasterS3A同源性为75.3%。比较结果显示这是一个新的家蚕基因,定名为家蚕s3a基因。本实验获得的s3a基因在家蚕感性和抗性品系以及添毒处理和未添毒处理中都具有差异表达,其中在抗性品系和近等基因系中的表达高于感性品系,在添毒处理中的表达高于未添毒组。因此推测它是一个与家蚕抗BmNPV相关的新基因。