摘要: 作为遭遇各种微生物的前线,昆虫的消化道在免疫反应中起到重要的作用。为了研究家蚕Bombyx mori肠道免疫反应,我们利用基于ACP(annealing control primer)的反转录PCR技术,从中肠组织中鉴定得到18个在经口器感染绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus后的差异表达基因,并利用荧光定量PCR分析了其中4个基因在感染后24h内的动态变化。结果表明:肽聚糖识别蛋白-L1(PGRP-L1)和一个丝氨酸蛋白酶前体基因特异性地受绿脓杆菌感染后上调;30kP蛋白酶A基因受绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌2种细菌感染后上调。我们的研究鉴定了经口器感染后家蚕中肠中参与入侵细菌识别和免疫信号途径的基因,可为对这些基因进一步的功能研究提供线索。

摘要: 家蚕Bombyx mori复眼突变系光泽眼(lustrous,lu)及光泽小眼(varnished eye,ve)都是由单基因控制的隐性突变,目前为止,其突变基因及突变机理还未知。为了了解其复眼突变性状内外部形态结构差异,本研究以家蚕正常品系大造Dazao(Dz)为对照,利用光学显微镜及扫描电镜对家蚕Dz,lu和ve的成虫复眼和幼虫单眼表面进行观察,并利用石蜡切片HE染色技术对3个品系复眼内部结构进行观察。结果表明:突变体lu和ve的复眼表面形态除了典型的富有光泽外,复眼形状、大小和小眼形态、排列及数量上都与正常型明显不同。突变体lu和ve的角膜、晶锥、感杆束及色素细胞均发生了异常。lu和ve不仅是复眼表面形态发生了变化,其内部结构也发生了很大的变化。本研究为lu和ve突变基因的克隆及突变机理的阐明提供了参考信息。

摘要: 为了解柞蚕Antheraea pernyi感染微孢子虫初期血淋巴内免疫系统及刺激应答相关蛋白质种类,本研究以柞蚕5龄雌幼虫的起蚕(结束4眠,刚完成蜕皮的幼虫)添食柞蚕微孢子虫Nosema pernyi为材料,对感染后血淋巴利用SDS-PAGE进行分离后,利用LC-MS/MS质谱技术和蛋白质组学分析对差异蛋白质条带进行鉴定。结果显示:感染微孢子虫144h后,血淋巴中分子量约为44kD(AP44)和28kD(AP28)的蛋白质条带表达量增高。质谱分析AP28和AP44蛋白质条带样品,共鉴定117个不重复蛋白质,其中2个样品共有蛋白质12个,AP28独有蛋白质52个,AP44独有蛋白质53个。对质谱数据利用COG数据库进行搜寻鉴定,显示AP28和AP44的鉴定蛋白质中涉及柞蚕免疫系统及刺激应答生物过程的蛋白质共有29个,其中AP28中包括热激蛋白、泛素样蛋白、泛素结合酶E2、保幼激素环氧水解酶、微管结合蛋白、溶菌酶、ADP-核糖基化因子、防御蛋白、肽聚糖识别蛋白等15个,AP44中包括DRK、酚氧化酶原、类免疫球蛋白等10个;二者共有热激蛋白hsp21.4、酚氧化酶原、抗菌肽等4个。本研究结果可以为今后研究柞蚕对微孢子虫的免疫应答及防御机制提供参考。

摘要: 为查明广东和广西地区家蚕Bombyx mori病原白僵菌的来源及其菌株间的相互关系,本研究利用了微卫星标记(simple sequence repeats,SSRs)技术,分别对采自广东、广西蚕区的白僵菌菌株居群之间和居群之内的遗传多态性进行了研究。结果发现,两广白僵菌居群之间的基因分化系数(Gst)是0.0590,多态位点百分率(PPL)为97.73%,Nei氏基因多样性指数(H)为0.1896,Shannon氏信息多样性指数(I)为0.3165,表明两广家蚕来源的白僵菌居群间的遗传分化较小;两个居群内部的遗传多态性研究结果分别是广东白僵菌居群的PPL=68.18%,H=0.1910,I=0.3044,而广西白僵菌居群的PPL=65.91%,H=0.1713,I=0.1791,表明广东白僵菌居群的遗传多样性水平较高,广西白僵菌居群遗传多样性水平相对较低。最后,利用Nei氏遗传距离进行了两广地区白僵菌菌株间地理来源关系的聚类分析,结果表明实验室保存菌株单独聚为类群Ⅰ,而不同采集地的菌株聚为类群Ⅱ。结果反映了生产来源的白僵菌菌株存在遗传多态性和基因分化现象,暗示了家蚕白僵病病原来源的复杂性,还说明应用SSRs技术进行家蚕白僵病病原的溯源是一条可行的途径。

摘要: 昆虫免疫稳态的维持有赖于准确地激活和有效地抑制Toll或IMD信号通路中的关键转录因子——Dorsal/Dif或Relish。在果蝇等昆虫中,已报道了多种降低转录因子稳定性和活性的免疫稳态调控分子,突变或敲除这类分子导致免疫系统的过度激活。对家蚕Bombyx mori免疫信号通路的研究中,至今为止尚无对这类分子的探索。本研究通过比较基因组学,在家蚕基因组中鉴定了多个可能参与免疫稳态调控的分子,包括Wnt家族成员、Ubc9、FAF和POSH等;并通过检测家蚕被微生物感染后这些分子在多种免疫器官中的诱导表达模式,发现这些分子的表达水平在微生物感染后普遍呈下降趋势,虽然在某些组织中表达量有明显的升高(>1.5倍),但此高表达水平均不能维持且迅速下降;而且免疫稳态调控分子和受其调控的信号通路的对应关系在不同组织中表现出差异。本研究是首次对家蚕免疫稳态调控分子的报道,为深入研究家蚕免疫负调控的分子机制提供了参考。