摘要: 为探讨持续高温胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长及健康的影响,分别在适宜温度(24℃,对照)和不同高温胁迫温度(29℃、32℃和35℃)条件下对该虾[体重(7.19±0.29) g]进行了为期30d的养殖试验。结果显示:(1)随着胁迫温度的升高克氏原螯虾的成活率(SR)显著下降(P<0.05);终末体重(FBW)、终末体长(FBL)、增重率(WGR)及特定生长率(SGR)等生长指标随着温度呈先升高后降低的趋势。在29℃时生长性能指标达到峰值并显著高于其他3个温度组(P<0.05);与24℃相比, 32℃的高温胁迫对该虾的生长性能未造成显著影响(P>0.05)而35℃的高温则使其生长性能显著下降(P<0.05);(2)胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性随着温度升高呈先升高后降低的趋势。在29℃时3种消化酶活性达到峰值并显著高于其他3个温度组(P<0.05),在32℃时淀粉酶和脂肪酶的活性显著高于对照组(P<0.05),在35℃时胃蛋白酶活性显著低于对照组(P<0.05);(3)在高温胁迫条件下,随着温度上升血淋巴中的酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的活性显著降低,而谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性逐步显著升高(P<0.05);肝胰腺的总抗氧化能力(T-AOC)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性在29℃时最低(P<0.05)且T-SOD活性显著低于其他温度组(P<0.05),而丙二醛(MDA)含量随温度上升而逐步显著升高(P<0.05);肝胰腺和鳃组织的热应激蛋白基因(HSP70)相对表达量在29℃时显著上升(P<0.05)且在35℃时最高(P<0.01)。结果表明, 29℃的持续高温虽可显著促进克氏原螯虾的生长与消化但对其免疫指标显著不利,而32℃及以上的持续高温胁迫则严重影响其存活与生长、消化、免疫及抗氧化功能。

摘要: 为研究B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma, Bcl-2)基因在内源性细胞凋亡通路中发挥的重要调控作用,实验利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得日本对虾(Marsupenaeus japonicus)MjBcl-2基因cDNA全长序列,并对其序列进行生物信息学分析;利用实时定量PCR (qPCR)技术分析了MjBcl-2在不同组织、不同水温胁迫及RNA干扰后的表达水平;同时利用TUNEL技术,检测MjBcl-2干扰后的细胞凋亡情况。结果显示:日本对虾MjBcl-2 cDNA全长为2432 bp,开放阅读框长度为726 bp,共编码241个氨基酸,分子量为26.80 kD;结构域预测分析表明MjBcl-2含有Bcl-2家族典型的保守结构域;多序列比对以及进化树构建结果表明, MjBcl-2与其他物种的相似度较高,保守性较强。定量PCR结果显示, MjBcl-2在日本对虾各个组织中均有表达,肌肉中表达量最高,鳃次之,心脏中表达量最低。低温(10℃和16℃)胁迫下日本对虾鳃和肝胰腺Bcl-2基因的表达量逐渐上升,在72h到达最高点;在干扰Bcl-2基因后,各个温度Bcl-2基因的表达量均下调,细胞凋亡基因Caspase-3的表达量显著上调(P<0.05)。TUNEL检测结果表明, RNAi组和NC组(对照组)随着温度的降低,凋亡细胞数量不断增加,在28℃处理组中有少量凋亡细胞, RNAi组与NC组凋亡细胞的数量没有明显的变化,在10℃低温处理组中, RNAi组凋亡细胞的数量明显高于NC组; 12h后, 28℃NC组、28℃RNAi组、10℃NC组和10℃RNAi组中鳃组织的细胞凋亡率分别为1.73%、2.35%、21.59%和33.70%。研究表明, MjBcl-2在日本对虾应对低温胁迫中发挥重要作用。

摘要: 研究通过转录组测序对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)SSR标记进行了发掘,获得SSR位点18592个。随机选取了63个SSR位点设计引物并利用10个个体进行多态性位点筛选,共获得31个具有多态的SSR标记,利用其中19个SSR标记对全同胞家系群(FS)119尾虾及孟加拉F3代野生群(MJL)199尾虾的群体遗传多样性进行分析,并对SSR位点与体质量性状进行关联性分析。结果表明:FS群体共检测到40个等位基因,平均等位基因数为2.1053,平均观测杂合度0.4525,平均期望杂合度0.3804,平均多态信息含量0.3076,处于中度遗传多态水平; MJL群体共检测到65个等位基因,平均等位基因数为3.4211,平均观测杂合度0.4105,平均期望杂合度0.4496,平均多态信息含量0.3882,处于中度遗传多态水平。19个SSR位点与FS群体体质量没有相关性(P>0.05),而在MJL群体中, 4个SSR位点与体质量显著相关(P<0.05)。对差异显著的位点进行不同基因型体质量性状的多重比较, MR28位点277/285基因型体质量均值极显著高于277/289和285/285基因型(P<0.01),显著高于285/289、273/289、270/273和285/293基因型(P<0.05); MR32位点266/266和266/270基因型体质量均值显著高于270/270基因型(P<0.05); MR34位点210/214基因型体质量均值显著高于210/210和214/214基因型(P<0.05); MR45位点174/190基因型体质量均值显著高于182/182和182/190基因型(P<0.05)。研究结果为罗氏沼虾分子标记辅助育种奠定了基础。

摘要: 抗菌肽是无脊椎动物非特异性免疫系统中重要的免疫因子，抗菌肽具有良好且广谱的抗菌活性，并且不易产生耐药性，有望替代传统抗生素药物发挥功能。甲壳素(Crustin)是目前甲壳类动物中研究比较广泛的一类抗菌肽家族。研究鉴定了来自克氏原螯虾(Procambarus clarkii)中的一种新型Crustin基因，命名为PcCruL。通过Pc-CruL抵抗病原性细菌的免疫防御反应的初步探究，发现Pc-CruL对克氏原螯虾的天然免疫系统至关重要，为深入研究克氏原螯虾奠定了一定的基础，在克氏原螯虾的人工养殖过程中的疾病的预防和治疗中具有一定的指导意义且提供了一定的理论基础。Pc-CruL包含330 bp，编码109个氨基酸，与已知的克氏原螯虾甲壳素同源性较低，为Ⅰ型甲壳素蛋白家族新成员。Pc-CruL在健康的克氏原螯虾的血淋巴、鳃、肠道、胃、心和肝胰腺中均存在，在血淋巴中的含量最高，而在肝胰腺中含量最低。同时进行了体外抑菌实验，结果表明Pc-CruL重组蛋白显著地抑制了几种常见的病原性细菌的生长，具有良好的广谱抑菌活性。体内实验表明，对健康的克氏原螯虾注射Pc-CruL重组蛋白可以保护克氏原螯虾，在副溶血弧菌感染后，提高存活率。Pc-CruL是克氏原螯虾中关键的免疫因子，在克氏原螯虾抵抗外界病原菌入侵和感染过程中起着重要的作用。

摘要: 研究旨在探究饥饿胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血淋巴生理生化指标、肠道组织病理和肠道微生态的影响。对克氏原螯虾进行为期28d的饥饿胁迫,分别于饥饿0、7d、14d和28d采集血淋巴和肠道样品。血淋巴生化分析结果表明,谷丙转氨酶(ALT)没有发生显著变化,血糖(GLU)水平随着饥饿时间延长逐渐降低(P<0.05),尿素(UREA)、甘油三酯(TG)水平呈现先上升后下降趋势(P<0.05),而总蛋白(TP)和谷草转氨酶(AST)则出现先下降后上升的趋势(P<0.05)。采用HE染色和TUNEL检测技术对肠道组织切片观察发现,饥饿胁迫使得克氏原螯虾肠道形态发生显著改变,肠腔变宽,肠绒毛萎缩,肌肉层厚度变薄,组织细胞凋亡指数上升。对肠道微生物16S rRNA V3—V4区进行高通量测序, Alpha多样性分析表明饥饿第7天肠道微生物多样性高于第0、第14和第28天。在门水平上12个样品主要以变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)等厌氧微生物为主,但在饥饿胁迫的第7天,厌氧微生物(Bacteroidetes、Firmicutes和Proteobacteria)在门水平丰度显著减少;属水平上则主要以拟杆菌属(Bacteroides)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、链球菌属(Streptococcus)、奈瑟菌属(Neisseria)及嗜血杆菌属(Haemophilus)为主,其属水平丰富度随饥饿程度的加深出现动态变化,在第7天出现最小值。综合研究发现,克氏原螯虾在面临食物短缺问题时,可能会通过改变能量物质利用途径适应饥饿代谢过程,同时不同程度饥饿胁迫会产生强烈的肠道应激反应,其菌群组成结构在不同水平的物种丰度上均发生显著变化。长期饥饿会导致肠道绒毛萎缩,细胞凋亡指数增加,可能影响虾的健康。