摘要: 为研究发酵豆粕在罗氏沼虾饲料中的适宜用量及替代后可能造成的影响,以含有30%鱼粉和18%豆粕的饲料为基础饲料(T0组),分别用2%(T2组)、5%(T5组)、8%(T8组)、15%(T15组)的发酵豆粕等蛋白替代基础饲料中的鱼粉和豆粕(2﹕1),共配制5种等氮等能的实验饲料。选用初始均重为(0.17±0.02)g的罗氏沼虾在室内水泥池网箱中进行为期64d的养殖实验。结果显示,发酵豆粕对鱼粉和豆粕的替代量影响罗氏沼虾的生长、血清生化及免疫基因表达。随着发酵豆粕添加量的增加,增重率和特定生长率呈先升后降的趋势,都以T8组最高。血清中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力随发酵豆粕添加量的增加均呈先升后降的趋势,各替代组丙二醛含量均显著高于对照组(P<0.05);血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性和总蛋白含量呈先下降后上升的趋势,且替代组不同程度低于对照组;T15组Toll受体、NF-κB、HSP70转录水平表达量显著高于其他各组(P<0.05)。以上结果表明用不同水平的发酵豆粕替代鱼粉和豆粕,显著影响罗氏沼虾的生长性能、抗氧化能力及免疫机能;在实验条件下,罗氏沼虾饲料中的发酵豆粕最佳使用量为8%。

摘要: 为探讨米虾鞣化激素在其蜕皮周期及表皮角质层形成过程中的作用,采用PCR技术克隆得到了米虾鞣化激素两个亚基基因的开放阅读框(ORF)序列。bursicon-αORF全长441 bp,共编码146个氨基酸;bursicon-βORF全长411 bp,共编码136个氨基酸。利用实时荧光定量PCR分析米虾整个蜕皮周期中鞣化激素2个亚基基因的表达特征,结果发现,鞣化激素bursicon-α和bursicon-β在米虾蜕皮周期的各个阶段的相对表达量存在差异,在蜕皮前期(D期)相对表达量开始上升,到D3期时相对表达量最高,蜕皮期E期相对表达量最低。RNA干扰(RNA interference,RNAi)介导bursicon-α和bursicon-β基因沉默后,发现米虾的蜕皮周期延长,表皮角质层明显变薄。结果提示,鞣化激素(Bursicon)与新形成的外骨骼中角质层的加厚与硬化密切相关,进而影响蜕皮时间。

摘要: 应用RACE技术克隆脊尾白虾血蓝蛋白大亚基基因,并通过攻毒实验揭示脊尾白虾血蓝蛋白基因的先天免疫防御作用,为脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)的免疫防治研究提供依据和思路。研究成功克隆了脊尾白虾血蓝蛋白大亚基基因全长cDNA序列,该大亚基cDNA全长2192 bp,开放式阅读框长2034 bp,5′非编码区长21 bp,3′非编码区长137 bp,将该基因命名为EcHcL。EcHcL编码667个氨基酸,前21个氨基酸组成信号肽,推测成熟肽的分子量为78.5 k D。Blast比对结果显示,由脊尾白虾血蓝蛋白EcHcL序列推导的氨基酸序列与日本沼虾、凡纳滨对虾血蓝蛋白氨基酸序列的同源性分别达到87%、73%,其M结构域氨基酸序列与斑节对虾、日本对虾等物种同源性性高达90%左右,由此推断该cDNA序列属于血蓝蛋白家族。组织表达分析结果显示,EcHcL基因在脊尾白虾鳃、卵巢、肝胰腺、心脏、肠、肌肉、胃、腹神经节、眼柄、血细胞中均有表达,肝胰腺中相对表达量最高。Real-time PCR分析发现EcHcL基因在金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌和对虾白斑综合征病毒(WSSV)感染后脊尾白虾肝胰腺和血细胞中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达模式,推测脊尾白虾EcHcL基因在免疫防御中具有重要作用。

摘要: 基于斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肠道菌的生理生化特性,为解决斑节对虾急性肝胰腺坏死综合征(AHPND)提供新思路,文章分离纯化健康斑节对虾肠道中的优势菌株;以致病性哈维氏弧菌为指示菌,用牛津杯法从纯化菌株中筛选拮抗菌;通过生理生化特征、Biolog系统鉴定及16S rDNA技术综合方法对菌株进行鉴定;通过药敏实验,评价拮抗菌株的安全性;绘制高敏拮抗菌株的生长曲线,得出其生长特性;通过测定其产酶活性,形成对其益生机制的初步推断。从斑节对虾肠道中共分离得到14株的优势土著菌,分别标记为P.m-1、P.m-2······P.m-14,经过拮抗实验得到了3株拮抗菌(P.m-1、P.m-9和P.m-13)。经鉴定P.m-1、P.m-9和P.m-13分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。药敏实验结果表明, 3株拮抗菌均不属于耐药菌, P.m-1对药物高度敏感。生长特征实验表明:P.m-1在2h进入对数期, 10h达到生长高峰,菌体密度可达1.14×10~9 cfu/mL,表现出了强劲的生命力。经过蛋白酶活性测定,P.m-1具有较强的产酶能力。优势菌P.m-1具有成为益生菌的潜力,后续将作为功能性饲料添加剂或水质调节剂进行应用,为AHPND进行生物防治提供新思路。

摘要: 为研究克氏原螯虾(Procambarus clarkii)Rab5(PcRab5)和Rab6(PcRab6)的生物学功能,利用同源重组技术构建了克氏原螯虾pET-B2m-PcRab5和pET-B2m-PcRab6原核表达载体,并进行了诱导表达和多克隆抗体的制备,采用ELISA和Western Blot技术检测了抗体效价和特异性。将PcRab5和PcRab6的原核表达蛋白和多克隆抗体注射到健康克氏原螯虾体内,研究了其对血淋巴细胞吞噬活性的影响。实验结果表明构建的pETB2m-PcRab5和pET-B2m-PcRab6原核表达载体经诱导后可表达目的蛋白,分子量均为67 kD,纯化后蛋白条带单一,纯度较高。重组表达纯化后的Pc Rab5和Pc Rab6蛋白免疫日本大耳兔分别获得效价为1:2048 K和1:512 K的兔抗血清,制备的抗体可分别特异性识别PcRab5和PcRab6蛋白。将PcRab5和PcRab6蛋白注射健康克氏原螯虾后,其血淋巴细胞中可吞噬荧光微球的细胞比例分别显著上升至38%和30%(P<0.01)。而将纯化的PcRab5和PcRab6多克隆抗体分别注射至螯虾体内后,其血淋巴细胞的吞噬细胞比例均出现显著下降(P<0.05), PcRab5和PcRab6蛋白参与了血淋巴细胞吞噬功能。实验为进一步研究克氏原螯虾PcRab5和PcRab6分子功能奠定基础,也可为理解甲壳动物Rab5和Rab6在血淋巴细胞吞噬功能中的作用提供帮助。