摘要: 根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物,利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechus rusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,构建原核表达载体pET-CYP4G2,将其转化入大肠杆菌Escherichia coli JM109中表达。序列分析结果表明,该基因(CYP4G2,GenBank登录号为EF429250)保守区域阅读框全长387bp,编码129个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为16.9kD和5.75;推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氨基酸序列一致性较高(63%86%),且具有细胞色素氧化酶的典型特征。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测到一条22kD大小的外源蛋白,与预测融合蛋白的分子量大小相应。CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2。

摘要: 利用昆虫几丁质酶对几丁质的调控作用破坏几丁质新陈代谢的平衡来防治害虫,在生物防治策略中具有很大的发展潜力。从处于预蛹期的小地老虎Agrotls ipsilon(Hufnagel)体中肠内提取总的RNA,经反转录,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了几丁质酶基因的cDNA序列。该基因序列已经登录GenBank并获得登录号为EU035316。该序列长度为2823个碱基,含有一个1674个碱基的开放读码框。开放读码框编码558个氨基酸残基,预测的分子量为62.5kDa,等电点5.12。推导得到的氨基酸序列含有2个N-位糖基化位点,20个O-位糖基化位点,含有2个几丁质酶所具有的保守序列:N-端的催化区和C-端的几丁质结合区。氨基酸序列与其他昆虫,特别是鳞翅目昆虫的几丁质酶高度同源。

摘要: β-微管蛋白在昆虫生长发育、信号传导、抗药性等方面具有重要作用。本研究以小地老虎Agrotis ypsilon(Rottemberg)3龄幼虫为材料,利用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到小地老虎β-微管蛋白基因的cDNA序列,命名为AgTubB(GenBank登录号:JN029962),并检测了该基因在不同生长发育阶段及不同器官中表达的情况。序列分析表明:小地老虎β-微管蛋白基因的cDNA序列包含1724个碱基,包括一个1347个碱基的开放阅读框,编码448个氨基酸组成的多肽,理论蛋白分子量为50.30kD,等电点为4.81。同源性分析表明,小地老虎的微管蛋白基因与棉铃虫Helicoverpa armigera微管蛋白基因的亲缘关系最近(氨基酸序列一致性高达99.55%),与本研究所比对的其他昆虫的β-微管蛋白基因也具有高度的同源性(氨基酸序列一致性90%99%)。在小地老虎不同发育阶段和不同器官中都检测到了β-微管蛋白基因的表达。本研究对深入研究该基因功能以及筛选微管蛋白抑制剂有重要意义。

摘要: 从杀虫植物杠柳Periploca sepium Bunge根皮中分离得到的杠柳新苷P具有很高的杀虫活性,为了探索其杀虫机理,采用经典的昆虫蛋白酶活性测定方法,比较研究了杠柳新苷P和无杀虫活性的杠柳新苷E对东方粘虫Mythimna separata与小地老虎Agrotis ypsilon6龄幼虫中肠类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的影响。结果表明:对东方粘虫弱碱性类胰蛋白酶,杠柳新苷P表现出强激活作用(酶活性为对照的3.43倍),激活时间可长达8h,而杠柳新苷E则无明显激活作用。杠柳新苷P和E对东方粘虫弱碱性类胰蛋白酶活性的影响二者差异显著(P=0.01),杠柳新苷P药后2,4和8h,东方粘虫中肠弱碱性类胰蛋白酶的活性分别是杠柳新苷E药后的15.4,106.8和242.7倍。酶活性测定结果还表明,与东方粘虫相比,小地老虎中肠类胰蛋白酶活性相对较低,且杠柳新苷P的激活作用也较弱,这可能是杠柳新苷P对东方粘虫具杀虫活性,而小地老虎对其不敏感的原因之一;另外,杠柳新苷P和E对试虫中肠类凝乳胰蛋白酶活性均无明显影响。据此推测,杠柳活性成分新苷P对东方粘虫中肠弱碱性类胰蛋白酶的激活作用可能是造成试虫中毒的机理之一。

摘要: 本文研究了小地老虎Agrotis ypsilon Rott.成虫的消化系统和马氏管的形态,详细描述了消化道、唾腺和马氏管三个部分的构造。观察到有两种构造是前人有关文献中未描述过的:1.吸泵被区分为几丁质的底壁和极薄的背壁;2.唾窦背面存在有一对囊形小体,它们伸入到吸泵中。