摘要: 世界性害虫小菜蛾Plutella xylostella(L.)田间种群已对阿维菌素药剂产生了高抗药性。本研究以小菜蛾对阿维菌素的抗性品系、敏感品系和回交群体组建作图家系,再利用AFLP技术构建小菜蛾对阿维菌素抗性基因的连锁图谱。用10组AFLP引物组合对未经药剂处理的小菜蛾成虫DNA选择性扩增,共获得1044条可区分的DNA条带,271条带具有多态性,χ2检验表明只有123个位点符合1∶1(P=0.05),其中的112个构成28个连锁群,其总长度为1222.7cM;用10组AFLP引物对经药剂处理后存活的小菜蛾成虫DNA扩增,所得的DNA条带中有54个条带符合分离比1∶1,经Mapmaker3.0对多态性位点分析,只有E1M4-15、E1M1-4和E1M4-2标记位点位于同一连锁群,3个AFLP标记与抗性基因的遗传距离分别为0cM,8.3cM和13.1cM。比较分析得出,抗性基因所在的连锁群是第5连锁群。结果显示AFLP连锁图谱对小菜蛾对阿维菌素的抗性监测具有很好的应用潜力。

摘要: 为确定灰毛豆Tephrosia purpurea树皮甲醇提取物中的杀虫成分,以白纹伊蚊Aedes albopictus 4龄幼虫为靶标昆虫,在活性跟踪的基础上利用色谱技术分离其活性成分,然后根据各化合物的核磁共振图谱和质谱数据确定化合物的结构,并利用玻片载蚜法和点滴法测定了各化合物对桃蚜Myzus persicae无翅蚜成虫和小菜蛾Pluttella xylostella 3龄幼虫的毒杀活性。结果表明:从该植物树皮甲醇提取物中共分离、鉴定了10个对白纹伊蚊幼虫具有毒杀作用的化合物,即12a-羟基鱼藤酮(12a-hydroxyrotenone),4'-hydroxyemoroidocarpan,豆薯内酯(pachyrrhizine),鱼藤酮(rotenone),6-甲氧基香豆素(6-methoxycoumarin),(-)-edunol,obovatin,pongachin,12-acetyelliptinol和2-hydroxyrotenone。这些化合物对该蚊虫幼虫处理24 h的LC50值分别是12.5,22.1,25.0,34.1,43.4,58.4,121.9,191.0,219.8和250.0 mg/L。3个化合物(4'-hydroxyemoroidocarpan,鱼藤酮和12a-羟基鱼藤酮)对桃蚜成虫和小菜蛾3龄幼虫表现出毒杀活性,它们对桃蚜24 h的LC50值分别是49.9,1.9和0.9 mg/L,对小菜蛾幼虫24 h的LD50值分别是49.8,197.1和40.9μg/头。首次从该植物中分离得到6个已知的黄酮类化合物[4'-hydroxyemoroidocarpan,2-hydroxyrotenone,(-)-edunol,12-acetyelliptinol,pongachin和obovatin]和2个已知的香豆素类化合物(6-甲氧基香豆素和豆薯内酯)。阐明这些杀虫化合物的结构不仅有利于理解植物和昆虫的关系,而且有助于评价该植物及其活性化合物作为植物源农药开发利用的潜力。

摘要: 半闭弯尾姬蜂Diadegma semiclausum是小菜蛾Plutella xylostella的优势内寄生蜂,拥有毒液、多分DNA病毒(PDV)等寄生因子,能有效调控寄主幼虫的营养生理和免疫系统,但其毒液在这过程中的功能不明。本文利用SDS-PAGE方法分析了半闭弯尾姬蜂毒液的蛋白组分,利用寄主幼虫血细胞体外原代培养的方法,研究了小菜蛾幼虫血细胞噬菌能力在半闭弯尾姬蜂寄生后的变化情况。结果表明:半闭弯尾姬蜂毒液蛋白分子量主要集中在35220kDa之间,少数小于15kDa,但分子量处于3570kDa之间的蛋白含量较高,与其他寄生蜂毒液蛋白相似。半闭弯尾姬蜂毒液单独对寄主小菜蛾幼虫功能血细胞(浆血细胞和颗粒血细胞)的延展能力和吞噬功能不产生破坏作用。但半闭弯尾姬蜂寄生后短时间内,寄主功能血细胞的延展受到抑制,然而功能血细胞仍然能识别外源异物,却无法进一步吞噬外源物;寄生后24h,功能血细胞的延展力恢复,颗粒血细胞的吞噬作用可顺利完成。本研究证明了半闭弯尾姬蜂寄生能暂时性地抑制颗粒血细胞的延展性从而影响其噬菌过程。

摘要: 为了探讨小菜蛾Plutella xylostella血淋巴对玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea的防御机制,利用吉姆萨染色法在光镜下观察了小菜蛾4龄幼虫血细胞感染不同致病力玫烟色棒束孢后的免疫反应。结果表明:玫烟色棒束孢的入侵可导致小菜蛾血细胞数量发生改变,表现为入侵初期血细胞总数增加,不同类型血细胞比例改变等。体表接种后8-45h,高致病力菌株PFCF-001处理的幼虫血细胞总数在24h出现最高值6250个/mm3,而低致病力菌株PFCF-D58处理在36h达到最高值3000个/mm3,比高致病力菌株处理滞后12h。不同菌株处理下虫体参与防御反应的主要血细胞类型为浆血细胞和粒血细胞。小菜蛾幼虫血细胞在感菌初期能够产生粘附、吞噬、包被及形成结节等一系列防卫反应,但最终无法抵挡高致病力菌株PFCF-001的侵染。结果说明小菜蛾幼虫血淋巴对玫烟色棒束孢的防御反应只有短暂的抑制作用,不能从根本上清除、消灭玫烟色棒束孢。

摘要: 【目的】克隆小菜蛾Plutella xyostella气味受体Or83b基因,并进行原核表达,为研究小菜蛾寄主选择行为的分子机理,开发昆虫行为调节剂提供基础。【方法】提取小菜蛾的总RNA,反转录获得总cDNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序,然后将目的基因克隆到大肠杆菌Escherichia coli表达载体pET-32a(+)中表达。经酶切、PCR及测序鉴定正确后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE,Western印迹鉴定表达蛋白。【结果】获得了编码小菜蛾Or83b的cDNA序列,该基因阅读框长1 413 bp,编码471个氨基酸,预测的等电点为7.19,命名为PlxyOr83b(GenBank登录号为GQ923610);成功构建了pET-PlxyOr83b原核表达重组质粒,目的基因获得高效表达,其融合蛋白分子量为32.0 kD,Western blot检测结果进一步表明PlxyOr83b在大肠杆菌DE3中得到正确表达。【结论】成功克隆和表达了小菜蛾气味受体基因PlxyOr83b,该基因与其他昆虫Or83b基因基本一致。