摘要: 活体微注射测定结果表明 ,将 0 5毒囊当量 (venomreservoirequivalent,VRE)的蝶蛹金小蜂毒液注射于其寄主菜粉蝶蛹体内 ,注射后 4 2 4h寄主浆血细胞和颗粒血细胞的延展、存活和对SephadexA 5 0微珠的包囊能力显著下降 ;以 0 0 0 2 0 0 2VRE μL的该蜂毒液处理其离体寄主血细胞均能产生同样的生理效应。该毒液抑制 90 %菜粉蝶蛹浆血细胞和颗粒血细胞延展的浓度各为 0 0 0 0 76VRE μL和 0 0 0 80 4VRE μL。可见 ,蝶蛹金小蜂毒液能显著抑制其寄主血细胞的延展和包囊作用 ,并导致血细胞的死亡。然而 ,同样条件下丽蝇蛹集金小蜂毒液对其非自然寄主菜粉蝶蛹的血细胞延展、存活和包囊作用则无任何效应。可见 ,寄生蜂毒液的生理作用具有明显的寄主特异性。

摘要: 为了建立蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液抑制寄主血细胞免疫活性组分合适的分离纯化方法,就等电点沉淀法、乙醇沉淀法、75%硫酸铵沉淀法、75%硫酸铵沉淀法+40℃加热处理法,以及75%硫酸铵沉淀法分别与3种不同滤膜的分子大小截留法的组合等7种方法对毒液蛋白分离效果及活性的影响进行了比较。结果表明:等电点沉淀法获得的组分抑制寄主菜粉蝶Pieris rapae离体血细胞延展和包囊的活性最强,乙醇沉淀法次之,75%硫酸铵沉淀法最弱。从蛋白组分的SDS-PAGE图谱来看,等电点沉淀法获得毒液组分相对最纯,仅有3条主要谱带,分子量大小在45116.2kDa范围内;乙醇沉淀法次之,有5条主要谱带,分子量大小在24116.2kDa范围内;硫酸铵沉淀法的谱带组成与毒液蛋白粗提液相似。3种分子大小截留法获得的毒液组分的活性分析表明,强活性组分分子量大小可能都大于100kDa。综合认为,7种方法中以等电点沉淀法提取分离蝶蛹金小蜂毒液蛋白相对为最适。

摘要: 为探明蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液对其寄主菜粉蝶Pieris rapae蛹颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力的影响,本研究分别采用Na2-EDTA处理和尼龙毛法对菜粉蝶蛹颗粒血细胞与浆血细胞进行分离纯化;再采用离体细胞培养方法,研究了菜粉蝶蛹颗粒血细胞、浆血细胞各自在包囊和吞噬反应中的作用,以及蝶蛹金小蜂毒液对其所产生的影响。结果表明:颗粒血细胞和浆血细胞均参与了包囊反应,其中前者包囊作用明显,后者作用微弱,但两者同时存在时包囊作用最为明显;血淋巴浆质对颗粒血细胞和浆血细胞包囊反应均无显著影响。毒液对颗粒血细胞和浆血细胞的包囊能力均存在显著的抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量效应特征。此外,菜粉蝶蛹颗粒血细胞和浆血细胞均具吞噬能力,其中前者吞噬能力显著强于后者;毒液对颗粒血细胞与浆血细胞的吞噬能力亦均存在显著的抑制作用,且该抑制作用亦具有显著的剂量效应特征。结果说明,菜粉蝶蛹颗粒血细胞及浆血细胞均参与寄主的细胞免疫反应,蝶蛹金小蜂毒液对其寄主颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力均存在显著的抑制作用。

摘要: 昆虫主要依靠先天免疫反应来抵御外源异物的入侵,而与血淋巴黑化及抗菌肽合成等过程密切相关的丝氨酸蛋白酶激活级联反应在其中起着重要作用。为阐明丝氨酸蛋白酶在菜粉蝶Pieris rapae免疫中的作用,本文通过简并引物RT-PCR克隆获得了菜粉蝶丝氨酸蛋白酶家族基因Pr-SP1的cDNA片段,并利用RACE法扩增获得其全序列。该cDNA序列长1489bp,其中开放阅读框长1059bp,共编码353个氨基酸残基。Pr-SP1含一长度为20个氨基酸残基的信号肽序列,其蛋白理论分子量为36.85kDa,理论等电点为6.41。多序列比对结果表明,Pr-SP1与其他昆虫的同源蛋白基因序列上存在较高一致性,在N端有一个发夹结构域,而C端是一个具有催化活性的结构域。实时荧光定量RT-PCR及免疫印迹结果表明,蛹期Pr-SP1主要在颗粒血细胞内进行转录,其蛋白产物主要定位在血浆;Pr-SP1在不同虫态及虫龄都有转录,其蛋白产物在不同虫态及虫龄都有表达,其中5龄幼虫最高,卵期最低;Pr-SP1的转录水平及其蛋白产物的表达水平均会被大肠杆菌Escherichia coli、藤黄微球菌Micrococcus luteus和巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris诱导。根据这些结果分析认为,Pr-SP1属于Sptzle蛋白酶前体激活酶,并参与菜粉蝶的先天免疫反应。

摘要: 目前关于蝶类线粒体基因组全序列及其分子进化的研究还不多见。本研究通过长PCR和引物步移法对菜粉蝶Pieris rapae Linnaeus线粒体基因组全序列进行了测定和初步分析。结果表明:菜粉蝶线粒体基因组全长15157bp,包含13个蛋白编码基因、22个tRNA和2个rRNA基因以及1个非编码的控制区域,它们的长度分别是11196bp,1474bp,2093bp和393bp。37个基因的位置与已报道的其他蝶类基本一致,共有10对基因间存在总共59bp的重叠,重叠碱基数在135bp之间;基因间隔序列共计13处120bp,间隔长度146bp不等,最大的基因间隔46bp,位于tRNAIle和tRNAGln基因之间。另外,基于13个蛋白质编码基因的氨基酸序列,重建了基于蛋白质编码基因序列数据的11种代表性蝶类的NJ和MP系统树。结果表明:凤蝶类(包括凤蝶和绢蝶)为一大支系,粉蝶类、灰蝶类与蛱蝶类(包括蛱蝶、珍蝶)构成另一大支系。结果不支持粉蝶科与凤蝶科(包括凤蝶类和绢蝶类)构成单系群,却显示粉蝶科、灰蝶科和蛱蝶科的组合为单系群。