摘要: 为研究不同浓度的玉屏风多糖合生元对热应激草鱼免疫性能的影响,选360尾健康草鱼Ctenopharyngodon idella (20±2) g,随机分为4组。其中Ⅰ组为对照组,试验组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)在饲喂基础日粮的基础上分别添加0.08%、0.12%和0.20%玉屏风多糖,并在饲喂前按复合益生菌体积(mL)/饲料重(g)为1%的剂量添加复合益生菌拌料,整个试验期为21d。在饲养试验结束后,对草鱼进行热应激48h处理,在0h、6h、24h和48h的4个时间点采集样品并测定血清、肝脏生化指标和肝脏相关基因表达量。结果表明:Ⅲ组草鱼血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)在各时间点均显著低于对照组(P<0.05);同时,草鱼肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽还原酶(GR)在各时间点均不同程度高于对照组,其中SOD在0h和24h(P<0.05), GR在0h和48h均显著高于对照组(P<0.05),而MDA均低于对照组,其中在24h和48h显著低于对照组(P<0.05);草鱼肝脏中Nrf2、Cu/Zn-SOD、GSH-Px、GR、HSP70和MHCⅡ相对表达量在各时间点均不同程度高于对照组,其中GR和MHC II相对表达量在各时间点均显著高于对照组(P<0.05),而Keap1和IL-8在各时间点均在不同程度低于对照组,其中Keap1在各时间点均显著低于对照组(P<0.05), IL-8均差异不显著(P>0.05)。总之,随着热应激时间的延长,草鱼的血清和肝脏生化指标、肝脏相关基因表达量均产生了不同程度的变化,说明热应激后草鱼产生了强烈的应激反应。在饲料中添加0.12%的玉屏风多糖合生元最有利于提高草鱼的抗氧化应激能力,有效缓解肝脏氧化损伤,具有较好的免疫调节作用。

摘要: 白细胞介素10(Interleukin-10, IL-10)参与机体免疫应答调节,协同其他细胞因子维持免疫系统稳态。为探究草鱼(Ctenopharyngodon idella)IL-10的细胞来源,研究利用大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli)表达系统制备了高纯度的草鱼IL-10重组蛋白,免疫小鼠制备单克隆抗体后通过免疫印迹、激光共聚焦和流式细胞术对抗体进行分析。结果表明,获得的单克隆抗体不仅能特异识别大肠杆菌表达的Ci IL-10重组蛋白,而且能识别HEK293细胞中表达的真核IL-10重组蛋白。脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和草鱼白细胞介素1β(IL-1β)刺激草鱼性腺细胞系(GCO)36h的免疫荧光染色分析表明,草鱼IL-10单克隆抗体能与草鱼内源IL-10结合,但IL-10阳性细胞数量在LPS处理前后无明显变化。该研究成功制备了高纯度Ci IL-10重组蛋白,获得了特异性好的高质量单克隆抗体,为研究草鱼ILC2和Th2细胞的增殖、分化和功能奠定了基础。

摘要: 为探索基于高通量筛选抗性主效miRNA功能分子的方法应用于抗性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的选育,研究借助高通量测序鉴定分析感染GCRV前后的草鱼头肾组织中miRNAs。测序结果共鉴定出821个成熟miRNAs,其中118个在GCRV攻毒组特异表达, 82个为未攻毒组特有;差异分析结果显示, GCRV处理后有88个miRNA显著下调表达、46个miRNA显著上调表达; qPCR结果显示miR-21在GCRV感染组中的头肾中表达量最高, miR-194a在两个比较组中的差异倍数最大,达到48倍之高;组织表达结果发现部分差异表达miRNA在脾脏、肾脏、头肾、皮肤和鳃等免疫相关器官中高表达;这些结果提示不同的miRNAs在草鱼的GCRV应答过程中发挥着不同的功能,为抗病草鱼的选育提供可参考的分子资源。

摘要: 为了探讨草鱼(Ctenopharyngodon idellus)越冬期间氧化应激状况及其与组织脂肪酸比例变化的关联性,将草鱼[初始体重(1053.33±16.11) g]分别置于室外水泥培育池,自然越冬处理0、1周、2周、4周、8周、12周和16周后,进行生物学性状指标,肝胰脏、肌肉、前肠、脂肪组织和血清抗氧化能力指标及肝胰脏、肌肉、脂肪组织脂肪酸比例的测定,同时进行了抗氧化能力指标与脂肪酸比例间的关联性分析。结果表明,在越冬期间,草鱼机体体重、肝胰脏重量、肥满度、肝体比、脏体比、肠体比和腹腔脂肪指数均发生显著下降(P<0.05);但是肾指数和脾指数显著上升(P>0.05)。氧化胁迫应激最大的3个组织分别是脂肪组织、肝胰脏和肌肉。肝胰脏PUFA比例对总体脂肪酸比例产生了主要的影响(主成分载荷特征值>0.5),肌肉C18:2n-6和C16:0比例对总体脂肪酸组成产生主要影响,脂肪组织中的PUFA、n-6PUFA、SFA和MUFA比例对总体脂肪酸比例产生了主要影响;关联分析表明草鱼脂肪组织中SFA在越冬期间供应能量同时,与氧化应激乃至机体损伤显示正相关关联性,肌肉中PUFA和MUFA比例变化分别与氧化应激,甚至机体损伤显示主要正相关的关联性,而肝胰脏中MUFA比例变化与氧化应激乃至机体损伤显示主要正相关的关联性。研究表明,越冬期间草鱼机体受到了很强的氧化应激现象,其中脂肪组织受到的应激最强烈;肝胰脏、肌肉和脂肪组织脂肪酸比例发生了显著变化,同时与各组织抗氧化性指标进行关联分析发现:脂肪组织中的SFA、肝胰脏中的MUFA、肌肉中的PUFA和MUFA与氧化应激乃至机体损伤间具有较为直接的联系。研究提供的基准研究信息可用于制定有效越冬前投喂的策略,同时在越冬期间以及越冬后的恢复阶段做出适当的管理与投喂决策,以期改善草鱼越冬后存活率及其生产效率。

摘要: 为了探讨草鱼(Ctenopharyngodon idellus)在越冬期间能量利用的代谢适应机制,将草鱼初始体重[(1053.33±16.11) g]置于室外水泥培育池,分别在自然越冬饥饿0、1、2、4、8、12和16周后进行采样,进行肌肉常规成分、血清能量代谢物、组织糖原、甘油三酯含量及AMP活化蛋白激酶和糖脂蛋白代谢相关基因转录水平的检测。结果显示:越冬饥饿1周后,草鱼肌肉各常规成分含量显著变化(P<0.05);随着越冬饥饿时间的延长,血清甘油三酯(TG)、甘油(Glycerol)、总蛋白(TP)、总胆固醇(TCHO)和血糖(GLU)含量先显著降低(P<0.05),随后保持稳定,游离脂肪酸(Free fatty acids)含量显著上升(P<0.05);肝胰脏糖原和肌肉糖原及肝胰脏、肌肉和脂肪组织TG含量显著降低(P<0.05);血清ATP、ADP和AMP含量显著降低, ADP+AMP/ATP比值显著升高(P<0.05);肝胰脏、肌肉及腹腔脂肪ampk α1、ampk α2基因表达显著上升(P<0.05),下游糖脂及蛋白代谢相关基因转录水平显著上升(包括atgl、hsl、cpt1α、cd36等脂分解相关基因; gk、pfk、pk等糖酵解相关基因; gldh、 igf-1等蛋白分解相关基因)或显著下调(acc、fas等脂合成相关基因; creb、foxo1、pgc-1α、pepck、g6pase、glut2等糖异生相关基因; tor、s6k等蛋白合成相关基因)(P<0.05)。研究表明,草鱼在越冬饥饿期间,血清、肝胰脏、肌肉和脂肪组织生化组成发生了上述变化的同时,越冬饥饿胁迫激活了AMPK通路,促进了各组织糖酵解、脂质分解、脂肪酸β氧化、脂肪酸转运及蛋白分解的进程,抑制了糖原合成、脂质合成和蛋白合成的过程,进而维持了机体能量稳态。