摘要: 试验旨在研究饲粮添加α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)对氨氮胁迫下草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鳃Na~+/K~+-ATP酶活性及血液生化指标的影响。选取初始体重为(24.79±0.11)g的健康草鱼,随机分为3个处理组(对照组,养于曝气后氨氮浓度为1.51 mg/L的自来水中并饲喂基础饲粮;氨氮组,养于氨氮浓度为18.37 mg/L的水中并饲喂基础饲粮;α-KG组,养于氨氮浓度为18.37 mg/L的水中并饲喂添加0.75%α-KG的饲粮)。每处理组设3个重复,每个重复30尾鱼,养殖试验为期42d,分别于第1、第14、第28和第42天采样。结果表明:在饲料中添加α-KG能够有效缓解氨氮胁迫导致的草鱼血浆氨含量(1d)、谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)活性(14d)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性(28d)的显著升高和鳃Na~+/K~+-ATP酶活性(28d)、血浆谷丙转氨酶(Alanine aminotransaminase,ALT)(28d和42d)活性、血浆尿素(UREA)含量(28d)的显著降低,显著增加氨氮胁迫下草鱼血浆球蛋白(Globulin,GLB)含量(28d)。即饲粮α-KG的适量添加能够有效缓解草鱼氨氮胁迫所致的血氨含量升高,维持氨氮胁迫下草鱼鳃Na~+/K~+-ATP酶、血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶的活性和血浆球蛋白、尿素含量的稳定,从而有利于草鱼缓解氨氮胁迫。

摘要: 为研究睡美人(Sleeping Beauty,SB)转座子系统在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾脏细胞(CIK)中介导的整合特性,构建了SB转座子和转座酶在两个质粒的二元反式(trans)转座子系统,以及转座子和转座酶元件在同一个质粒的一元顺式(cis)转座子系统;通过转染CIK细胞,用荧光显微镜、流式细胞仪和荧光定量PCR分析了转染2d后及嘌呤霉素筛选4周后的细胞,测定Ds Red转染效率和整合效率,并结合高效热不对称交互式PCR扩增获得SB转座子整合位点的序列。结果表明,SB二元转座子系统的整合效率远高于一元系统;SB转座子与转座酶比例为1鲶2时,外源基因Ds Red的整合效率最高;SB转座子偏向于插入草鱼基因组TA序列处。研究表明优化SB转座子和转座酶的比例能提高外源基因在草鱼细胞中的整合效率并快速获得突变细胞,同时为在鱼类细胞中采用SB转座子建立突变体文库提供理论基础。

摘要: 研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为实验对象,运用厌氧培养的方法,研究了饥饿状态下草鱼肠道黏膜固有微生物的类群及其在不同肠段的分布。实验结果显示草鱼前肠、中肠与后肠中细菌的数量分别是3.17×10~3、1.63×10~4和1.79×10~7 cfu/g。研究共分离到274株单菌落,经16S r RNA鉴定,分别属于拟杆菌属(Bacteroides spp.)、鲸杆菌属(Cetobacterium spp.)、梭形杆菌属(Fusobacterium spp.)、气单胞菌属(Aeromonas spp.)、希瓦氏菌属(Shewanella spp.)、芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、泛菌属(Pantoea spp.)和柠檬酸杆菌属(Citrobacter spp.)8个种类,其中专性厌氧细菌的数量占9.1%,兼性厌氧细菌的数量占90.9%。进一步分析发现,前肠中只分离到兼性厌氧细菌,中肠与后肠专性厌氧细菌和兼性厌氧细菌都有分布。专性厌氧细菌Bacteroides paurosaccharolyticus和Bacteroides luti在中肠与后肠都有分布,而Cetobacterium somerae和Fusobacterium ulcerans只在后肠有发现。兼性厌氧细菌是草鱼肠道黏膜的优势菌群,其中嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila占73.7%。草鱼肠道不同部位固有厌氧微生物组成存在差异,细菌数量也明显不同,后肠中具有更高的细菌丰度和多样性。

摘要: 为了探究草鱼防御素的免疫调节作用,研究通过Clustal Omega多序列比对和I-TASSER二级结构预测,发现草鱼β-防御素1(Ctenopharyngodon idella β-defensin 1, CiBD1)是一类具有两亲性的富含半胱氨酸的小分子阳离子肽,其结构在硬骨鱼类中高度保守;通过构建pET-32a-CiBD1原核表达载体, IPTG诱导表达后经过Ni~(2+)亲和层析法纯化和肠激酶酶切获得CiBD1重组蛋白,通过CFU平板法验证了CiBD1的抑菌活性,当蛋白浓度达到200μg/mL时,对革兰氏阴性菌(G~+)及革兰氏阳性菌(G~–)都具有显著的抑制活性;趋化实验表明CiBD1在50 ng/mL时对草鱼原代白细胞趋化活性最佳;通过个体实验探究了CiBD1重组蛋白对嗜水气单胞菌灭活疫苗的免疫佐剂效应,发现添加CiBD1佐剂组死亡率显著低于单独疫苗组,且该组IgM和MHCⅡ转录水平及血清中补体3(C3)和溶菌酶含量都显著高于对照组。研究表明CiBD1重组蛋白在细菌抗感染免疫中发挥着重要作用,在水产养殖中具有一定的应用前景。

摘要: 草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)是导致该病的主要病原,研究将Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒GCRV-873株的外衣壳蛋白VP7基因进行原核表达,获得高度纯化VP7重组蛋白,通过免疫BALB/c小鼠,首次制备筛选得到高效价单克隆抗体。结果显示, GCRV-I vp7基因可在原核表达系统中高效表达,主要以包涵体形式存在,大小约为40 kD。免疫小鼠后筛选到了5株IgG类型阳性杂交瘤细胞株,其中3株亚型为IgG1, 2株亚型为IgG2a。Western Blot实验和直接免疫荧光实验显示,该抗体可特异识别GCRV-873,并且ELISA检测原核重组蛋白的效价高达204800,亲和常数为4.04×10~9。研究制备的VP7蛋白单克隆抗体,为GCRV-I病毒诊断技术开发及病毒感染机制的深入研究提供实验基础。