摘要: 为了揭示草鱼对磷的吸收机制,运用RT-PCR和快速扩增c DNA末端方法,从草鱼(Ctenopharyngodon idella)肠中克隆获得钠磷协同转运载体基因Slc34a2,该基因全长为2446 bp,包含了1938 bp的开放阅读框,47 bp的5′非编码区(Untranslated region,UTR)和461 bp的3′UTR,编码645个氨基酸。草鱼SLC34A2蛋白的分子式为C3215H5125N801O902S30,分子量大小为70.39 k D,等电点为5.68,总平均疏水指数为0.458。对草鱼SLC34A2蛋白结构和功能预测分析,发现SLC34A2蛋白有11个跨膜域,1个半胱氨酸富集区,且N-端在胞外而C-端在胞内,也在第二个细胞外环中发现4个N-糖基化位点。用邻接法构建系统进化树,发现草鱼Slc34a2基因与硬骨鱼类聚类为一支,且草鱼SLC34A2蛋白与鲤(Cyprinus carpio)和斑马鱼(Danio rerio)SLC34A2的相似性最高,分别为90.3%和87.0%。实验采用了实时荧光定量PCR对草鱼Slc34a2 m RNA进行组织表达分析,结果表明Slc34a2 m RNA在组织中广谱表达,且在肠中表达最高,其次是肝脏、鳃、肾脏、脾脏、皮肤、肌肉、脑和头肾。实验为以后研究提高鱼对磷的利用和减少磷的排放奠定分子基础。

摘要: 为了探讨饲料氧化鱼油对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝胰脏组织结构及其功能的影响,研究以豆油、鱼油及氧化鱼油作为饲料脂肪源,分别设计鱼油组(6F)、豆油组(6S)、2%氧化鱼油(4S2OF)、4%氧化鱼油(2S4OF)及6%氧化鱼油(6OF)5组等氮、等能的半纯化饲料,在池塘网箱中养殖72d。结果显示:氧化鱼油显著增加草鱼血清ALB、GLB、MDA和GSH含量(P<0.05),显著降低肝胰脏GSH和SOD含量(P<0.05);氧化鱼油会显著增加草鱼肝胰脏指数及肝胰脏脂肪含量(P<0.05),且草鱼血清TG含量显著上升(P<0.05),HDL/LDL显著下降(P<0.05);氧化鱼油使血清及肝胰脏TC含量显著增加(P<0.05),血清TBA显著下降(P<0.05),肝胰脏TBA显著上升(P<0.05);氧化鱼油会引起草鱼脂肪肝,损伤肝胰脏细胞线粒体,并导致肝胰脏细胞纤维化和组织萎缩。结果表明:饲料添加氧化鱼油会引起草鱼氧化应激,并降低草鱼肝胰脏抗氧化能力;扰乱草鱼肝胰脏脂肪代谢,引起脂肪肝;影响胆汁酸肝肠循环,使胆汁酸在肝胰脏中堆积,并损伤肝胰脏细胞线粒体,最终增加草鱼肝胰脏脂肪性肝炎发生率。

摘要: 为了阐明免疫刺激诱导草鱼肿瘤坏死因子TNF-α的体外表达特征,克隆了草鱼TNF-α的c DNA,构建了原核表达载体p ET-32-TNF-α,并在大肠杆菌DH5α中表达了His6-TNF-α。利用亲和层析镍柱纯化表达重组蛋白后将其作为免疫原免疫小鼠制备了抗草鱼TNF-α多克隆抗体。免疫印迹实验显示,制备的抗体能特异性识别细胞内源性TNF-α。在此基础上,分别研究了GCRV(草鱼呼肠孤病毒)感染、免疫刺激物Poly(I:C)及LPS处理下不同时间点草鱼肾细胞CIK中TNF-α的表达情况,结果表明,TNF-α在草鱼肾细胞内翻译水平的表达量基本保持稳定。研究显示经典的TNF信号通路激活因子不能引起CIK细胞内TNF-α蛋白水平的显著变化。

摘要: 应激(Stress)指生物受到外源或内源刺激后内稳态改变而产生的一系列反应~[1]。在鱼类养殖中,各种操作对鱼产生的惊扰及环境变化均会导致鱼类应激~[2,3]。应激使鱼类代谢强度增加,免疫和生长性能下降~[4,5]。有关人类和哺乳动物的应激研究已积累了大量的资料,相比之下,鱼类应激方面

摘要: 研究通过获得草鱼Noxa基因(Cinoxa)全长c DNA,进行序列分析和进化树构建,使用定量PCR(q PCR)的方法研究其在GCRV刺激下的表达模式。研究发现,草鱼Noxa基因的蛋白序列与斑马鱼Noxa基因具有高度相似性。通过分析草鱼和斑马鱼的Noxa基因的蛋白三维结构(3D)模型,研究发现两者具有高度一致的蛋白三维结构模式,该模型与高等哺乳类中的Bcl-2家族蛋白中C端结构域同源。对Cinoxa在GCRV刺激下的表达模式的研究表明,Cinoxa在GCRV感染后中肾、脾脏和头肾中表达发生显著性变化,攻毒后24h和120h出现显著上调表达。研究表明草鱼Noxa为斑马鱼Noxa的同源基因,并且参与了草鱼对GCRV入侵的应答反应,为深入研究鱼类Noxa应答病毒入侵的功能和转录调控机制奠定了基础。