摘要: 【目的】茶小绿叶蝉Empoasca onukii体表覆盖的网粒体具有超疏水性，杀虫剂喷雾触碰虫体后药滴动态是否受网粒体影响尚未完全清楚。本研究旨在明确网粒体在茶小绿叶蝉成虫抵御杀虫剂雾滴渗透的屏障作用。【方法】以罗丹明B(RhB)作为指示剂添加到测试的杀虫剂(联苯菊酯和茚虫威)中，利用可拍照显微镜观察记录联苯菊酯(1.25 mg/L和0.05 mg/L)和茚虫威(0.006 mg/L和0.0009 mg/L)喷雾处理后24 h,茶小绿叶蝉成虫翅面药滴滚落、蒸发、被抖动扫除等行为动态，分析翅面药滴大小与蒸发后固化形态的关系；测定网粒体移除前后药滴与翅面的接触角，统计不同疏水性翅面上的网粒体分布密度；收集并利用扫描电镜分析叶蝉体表抖落的药滴及药剂颗粒是否含有网粒体，同时观察网粒体与翅面残留溶质接触的显微形态。【结果】药滴动态观察显示，圆球状药滴在茶小绿叶蝉成虫翅面不会自行滚落，72.0%成虫静止等待翅面药滴蒸发，蒸发后形成药剂颗粒或不规则药斑与药滴大小无关，而与虫体翅面的疏水类型有关，蒸发后24 h内翅面的药剂颗粒都被叶蝉抖动扫除；在叶蝉疏水性强翅面上，药滴的静态接触角为141.63±8.06°,药滴蒸发后形成药剂颗粒，网粒体分布密度为6.1±1.2粒/μm2,而疏水性弱的翅面上药滴蒸发形成药斑，网粒体分布密度为2.2±0.9粒/μm2;SEM图片显示被茶小绿叶蝉抖落的药滴和药剂颗粒表面均带有网粒体，药斑和药剂颗粒的显微结构显示网粒体出现聚集并与残留溶质相融合。【结论】超疏水性网粒体的均匀分布决定药滴触碰茶小绿叶蝉成虫翅面后形成圆球状，网粒体的亲油性及团聚性促使药滴蒸发后形成药剂颗粒，网粒体的脱落性使药剂颗粒可被茶小绿叶蝉成虫抖动扫除。

摘要: 【目的】通过鉴定茶小绿叶蝉Empoasca flavescens成虫水状唾液蛋白中的细菌蛋白,解析叶蝉唾液的细菌种类。【方法】利用自制的收集装置和Parafilm膜夹营养液法对叶蝉成虫唾液进行收集,经超滤浓缩和电泳分离后,使用膜辅助样品制备技术法(filter-aided sample preparation, FASP)酶解,借助液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测蛋白,利用Mascot 2.2软件比对UniProt的细菌蛋白数据库进行查库分析从而鉴定唾液中的细菌蛋白。【结果】共鉴定到27个目49种细菌的142种蛋白。以变形菌门(Proteobacteria)细菌蛋白为主,共107个蛋白,其中又以α-变形菌纲(α-Proteobacteria)和γ-变形菌纲(γ-Proteobacteria)细菌蛋白占比最多。其次为厚壁菌门(Firmicutes)细菌蛋白,共28个蛋白,分别属于杆菌纲(Bacilli)和梭菌纲(Clostrida),这些蛋白参与氨基酸、维生素和能量代谢等。【结论】鉴定的细菌蛋白可能是叶蝉生活史的重要参与者。本研究为进一步研究共生菌、茶小绿叶蝉和茶树之间的关系提供基础信息。

摘要: [目的]探明茶小绿叶蝉Empoasca flavescens粘样蛋白EfMLP基因的分子特征、表达模式和生物学功能。[方法]基于茶小绿叶蝉转录组数据,PCR克隆获得4条EfMLP基因的全长cDNA序列并进行生物信息学分析;qRT-PCR检测EfMLP基因在茶小绿叶蝉不同发育阶段(卵、1-5龄若虫和初羽化雌雄成虫)和初羽化成虫不同组织(体壁、脂肪体、唾液腺、肠道、卵巢和精巢)中的表达量;通过饲喂法利用RNAi沉默茶小绿叶蝉5龄若虫EfMLP2和EfMLP4,生物测定分析EfMLP基因沉默后茶小绿叶蝉的存活率。[结果]获得4条茶小绿叶蝉EfMLP基因序列,分别命名为EfMLP1(GenBank登录号:OR504428),EfMLP2(GenBank登录号:OR504429),EfMLP3(GenBank登录号:OR504430)和EfMLP4(GenBank登录号:OR504431),这4条EfMLP基因编码蛋白均具有O-联糖基化位点形成MD结构域(mucin domain)且该结构域包含高度重复的串联重复序列,其中EfMLP3和EfMLP4的氨基酸序列含有保守的2型几丁质结合域(chitin binding domain,CBD)。系统发育分析结果表明,EfMLP被分到两个不同的分支上,属于两种不同的MLP类型,该结果与昆虫的分类地位无相关性,猜测可能与其功能分化相关。EfMLP1和EfMLP2在茶小绿叶蝉初羽化雌雄成虫和初羽化成虫唾液腺中均特异性高表达,而EfMLP3和EfMLP4的表达在卵、若虫和成虫等不同发育阶段和初羽化成虫脂肪体等多个组织中均可被检测到。与饲喂dsGFP对照组比较,饲喂dsEfMLP2和dsEfMLP4可分别有效抑制茶小绿叶蝉体内EfMLP2和EfMLP4的表达量,并可显著降低茶小绿叶蝉的存活率。[结论] EfMLP在茶小绿叶蝉取食中扮演重要的角色,可作为开发基于RNAi的叶蝉防治技术的潜在靶标。

摘要: 【目的】前期研究发现，云南普洱茶园的小绿叶蝉与我国其他产茶省茶园的小贯小绿叶蝉Empoasca（Matsumurasca）onukii形态相似，但阳茎形态略有差别。本研究旨在明确云南茶园发生的小绿叶蝉是否为小贯小绿叶蝉，以期为云南茶园小绿叶蝉防治提供科学依据。【方法】采集了云南4市11区/县13个茶园的小绿叶蝉样品和贵州省1个茶园、浙江省2个茶园的小贯小绿叶蝉样品。通过形态学观察、COI基因序列比对和杂交试验，以明确云南省茶园发生的小绿叶蝉种类。【结果】云南省13个茶园采集的小绿叶蝉样品雄虫阳茎干基腹面均具一刺突，而贵州和浙江省小贯小绿叶蝉样品无此特征。云南13个茶园的小绿叶蝉COI基因序列NCBI上的搜索结果与E.（M.）onukii的COI序列的一致性在99.35%～99.74%; 16个采样地的小绿叶蝉遗传距离两两比对在0.000～0.011;单倍型丰度聚类分析显示，云南的样品单独成支，贵州和浙江的样品聚集为一支。云南普洱茶园小绿叶蝉的雌雄成虫与浙江杭州小贯小绿叶蝉可自然发生交配，并产生可育的F₁代。两种群间无生殖隔离。正反杂交F₁代的孵化率、羽化率、若虫历期无显著差异。F₁自交的F₂代其单雌产卵量、羽化率、雌雄比和若虫历期无显著差异。【结论】云南茶园发生的小绿叶蝉为小贯小绿叶蝉E.（M.）onukii,我国茶园中的小贯小绿叶蝉已经分化出不同形态特征的地理种群。

摘要: 【目的】茶小绿叶蝉Empoasca onukii体表覆盖的纳米网粒体颗粒具有防蜜露粘黏、抗杀虫剂渗透等屏障作用。本研究尝试探索造成叶蝉体表网粒体防护层破坏的方法，跟踪分析茶小绿叶蝉成虫网粒体防护层破坏后的分泌节律及修复行为，并观察网粒体涂抹器的微观形态，以期阐明茶小绿叶蝉成虫涂抹修复纳米网粒体防护层的具体特征。【方法】用清水喷雾、喷粉和高湿处理以及用添加不同表面活性剂[0.2%洗洁精、 0.5%吐温80和0.05%有机硅助剂丝润(Silwet 618)]的杀虫剂喷雾(0.05 mg/L联苯菊酯)处理茶小绿叶蝉成虫，用指示剂药斑法及扫描电子显微镜(scanning electron microscope, SEM)观察这些处理对成虫翅面网粒体的破坏效果；以有机硅助剂丝润分别喷雾以及单翅涂抹成虫两种方式进行破坏处理，并以不做任何处理的成虫为对照组，通过可拍照显微镜记录成虫翅面出现网粒体白斑次数，并通过网粒体白斑次数分析不同处理组成虫网粒体分泌节律变化；通过Vegas软件分析茶小绿叶蝉网粒体涂抹动作，利用器官破坏法确定网粒体涂抹器所在部位，并通过SEM观察其微观结构。【结果】清水喷雾、粉尘和高湿环境不会对茶小绿叶蝉成虫体表网粒体防护层造成破坏，加有机硅助剂丝润的杀虫剂喷雾可在成虫翅面产生明显药斑，SEM图片显示网粒体与残留有机硅助剂团聚结块并掉落；有机硅助剂丝润喷雾处理组成虫网粒体的分泌间隔时长为(22.3±1.8) h,比对照组缩短了约8.0 h, 5 d内有机硅助剂丝润喷雾处理组成虫网粒体分泌频次为(8±1)次，比对照组高出约3次；成虫往体表涂抹修饰网粒体时前后足的振动频率可达(16.7±2.4) Hz;器官破坏法处理后足胫节微毛列造成叶蝉无法正常涂抹网粒体，这可能是由涂抹器微毛顶端反向弯曲造成的。【结论】有机硅助剂丝润可破坏茶小绿叶蝉成虫体表网粒体防护层，有机硅助剂处理后茶小绿叶蝉通过缩短网粒体的分泌间隔时长来修复网粒体防护层；前后足振动频率以及胫节微毛末端的正常弯钩是茶小绿叶蝉成虫完成纳米网粒体颗粒涂抹的关键。