摘要: 目的建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法。方法根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验。结果建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本。该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2%。结论建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法。

摘要: 目的建立兔斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)感染模型和巢式PCR诊断方法。方法利用剖检、显微镜观察、血液生化和病理组织学检查等方法对建立的兔E.stiedai模型进行鉴定。通过收集卵囊,提取E.stiedai的DNA,设计特异性引物,建立E.stiedai巢式PCR检测方法。结果临床剖检:兔腹围明显增大,解剖见肝脏肿大,肝脏表面和实质布满白色及淡黄色结节,胆囊和胆管肿大,胆汁呈淡黄色。显微镜观察:虫卵大小为(31.72～38.43)μm×(18.10～22.69)μm。血液生化检查:球蛋白(GLOB)指标偏高,肌酐(CREA)和碱性磷酸酶(ALKP)指标偏低,其余检测指标均在参考值范围内。病理组织学检查:肝组织和胆管中见大量粉红色E.stiedai虫卵。巢式PCR检查:最低检测限为1个卵囊DNA样本和1.14×103拷贝数质粒,阴性对照和空白对照均未出现条带,重复性实验变异性系数<5%。结论成功构建兔E.stiedai感染模型,建立的巢式PCR诊断方法可扩增出E. stiedai的特异片段,敏感性强,重复性好。

摘要: 在对北京动物园从南非引进的大食蚁兽进行检疫时发现粪便中有大量球虫卵囊,经鉴定为艾美耳球虫Eimeriaescomeli(Rastegaieff,1930)Levine and Becker,1933。从大食蚁兽新排出的粪便中收集卵囊并进行分离培养,卵囊经28℃孵化8 d可完全孢子化。卵囊多为椭圆形或亚球形,卵囊壁粗糙,呈棕黄色,无卵膜孔。卵囊的大小为长20.9±2.59μm,宽18.7±2.25μm,形状指数为1.1±0.07。卵囊壁厚度为1.1±0.18μm,分两层,外层厚,棕黄色的卵囊壁有放射状条纹,内层膜较薄,并且松散。卵囊内常有残体。孢子囊呈长卵圆形,轻微不对称,有斯氏体。大小为5.5～10.8μm×3.4～5.6μm,平均8.68μm×4.21μm。子孢子长形,平行排列,头尾相对。