摘要: 目的建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法。方法根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验。结果建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本。该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2%。结论建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法。

摘要: 目的建立兔斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)感染模型和巢式PCR诊断方法。方法利用剖检、显微镜观察、血液生化和病理组织学检查等方法对建立的兔E.stiedai模型进行鉴定。通过收集卵囊,提取E.stiedai的DNA,设计特异性引物,建立E.stiedai巢式PCR检测方法。结果临床剖检:兔腹围明显增大,解剖见肝脏肿大,肝脏表面和实质布满白色及淡黄色结节,胆囊和胆管肿大,胆汁呈淡黄色。显微镜观察:虫卵大小为(31.72～38.43)μm×(18.10～22.69)μm。血液生化检查:球蛋白(GLOB)指标偏高,肌酐(CREA)和碱性磷酸酶(ALKP)指标偏低,其余检测指标均在参考值范围内。病理组织学检查:肝组织和胆管中见大量粉红色E.stiedai虫卵。巢式PCR检查:最低检测限为1个卵囊DNA样本和1.14×103拷贝数质粒,阴性对照和空白对照均未出现条带,重复性实验变异性系数<5%。结论成功构建兔E.stiedai感染模型,建立的巢式PCR诊断方法可扩增出E. stiedai的特异片段,敏感性强,重复性好。