摘要: 艾美耳属Eimeria球虫是寄生于多种动物的一类细胞内寄生原虫。近年来随着荧光报告基因及药物筛选基因的应用,艾美耳属球虫的转基因研究取得了较为可喜的突破。转基因艾美耳球虫为球虫生物学、免疫学和遗传学研究提供了很好的研究材料。本文将对艾美耳球虫转基因研究取得的突破、所使用的转基因及鉴定技术,以及转基因球虫的潜在应用作一综述。

摘要: 和缓艾美耳球虫Eimeria mitis是7种鸡球虫中致病力弱的虫种,对于其免疫原性的认识至今仍有争论。本研究以和缓艾美耳球虫涿州株为研究对象,以初次免疫及二次免疫后鸡的卵囊排出量为标准评估了其免疫原性。同时利用ELISA检测了免疫后鸡群血清中球虫特异性Ig Y抗体的水平,并通过ELISPOT技术分析了二免后鸡群外周血单核淋巴细胞(PBMC)中分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量。结果显示,二次免疫后,鸡的卵囊排出量显著低于初次免疫,免疫组的血清特异性Ig Y抗体水平较低,而分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量较高。这些结果表明和缓艾美耳球虫涿州株具备良好免疫原性,且其激发宿主产生的保护性免疫以细胞免疫应答为主,有作为疫苗株的潜力。

摘要: 采用直肠接种毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)裂殖子方法对毒害艾美耳球虫卵囊进行纯化,用柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原TA4基因特异性引物,以纯化E.necatrix孢子化卵囊总RNA为模板,RT-PCR方法克隆出了一段新基因序列。该基因全长747bp,共编码248个氨基酸,与国外Brothers等(1991)从E.necatrix孢子化卵囊表面得到的NA4基因同源性达99.7%,与柔嫩艾美耳球虫TA4(No.AJ586531.2)基因同源性达到91.4%,拥有与柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因相同序列的一段信号肽。从结果可得出,新克隆的基因为E.necatrix NA4基因。此基因已登录GenBank,登录号为EU523548。

摘要: 运用单卵囊分离技术,从山西省某鸡场鸡球虫感染粪便样品中获得1株纯种球虫,鉴定为柔嫩艾美耳球虫并命名为Eimeria tenellaSX010323,并对其致病性进行了研究。(1)该球虫卵囊寄生于盲肠、为宽卵圆形,卵囊壁光滑、褐色,无卵膜孔,有极粒,无内、外残体。孢子囊呈长卵圆形,有斯氏体。卵囊大小范围为(16.80～28.80)μm×(14.40～25.20)μm,平均大小为(21.54±0.24)μm×(17.85±0.24)μm,形状指数为1.21±0.05。子孢子,大小范围为(10.20～12.75)μm×(4.40～7.25)μm,平均大小为(11.54±0.24)μm×(6.27±0.43)μm。潜隐期为141 h,最短孢子化时间为19 h;(2)63只11日龄的海兰白公雏随机分为7组,分别口服感染此新鲜卵囊1×103、5×103、1×104、2×104、5×104、1.0×105个,并设立不感染对照组。结果表明:所有感染组增重均低于对照组(P<0.05),各感染组间随着感染剂量的增加,增重和增重率显著降低,血便率和盲肠病变记分增加(P<0.05);(3)将4℃分别保存17、13、10、4、1个月和新鲜孢子化的虫株卵囊,以1.5×104个/只的剂量感染11日龄雏鸡,每组10只。结果表明:保存1个月和4个月活力较高,保存10个月活力开始下降,保存13、17个月活力下降较大。

摘要: 建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法根据E.stiedai的ITS1-5.8s RNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法。结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5μL,DNA的最优添加量是75 ng,环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8μmol/L、1.6μmol/L和0.15μmol/L,在63℃反应1 h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度。结论建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路。