摘要: 【目的】克隆和表达管氏肿腿蜂Scleroderma guani毒液抗凝血酶Ⅲ(Antithrombin Ⅲ)基因SgAT-Ⅲ,为深入研究该毒液基因的生理功能奠定基础。【方法】利用逆转录PCR技术克隆SgAT-Ⅲ基因开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列,使用生物信息学软件分析其基因序列结构特征,通过qPCR技术分析其在雌成虫不同组织中的表达模式,采用载体pCzn1对其进行原核表达。【结果】克隆得到SgAT-Ⅲ基因的ORF,长1 338 bp,编码446个氨基酸,其中第1-19位氨基端为信号肽,理论分子量49.49ku,等电点6.23。多序列比对分析表明,SgAT-Ⅲ与蚂蚁AT-Ⅲ具有较高的氨基酸一致性(>64%),C末端具有serpin蛋白家族典型反应中心环区,含有供靶标蛋白识别的活性裂解位点。系统发育分析表明,SgAT-Ⅲ与膜翅目其他昆虫的AT-Ⅲ亲缘关系较近,且与蚂蚁的AT-Ⅲ聚为一支。qPCR分析表明,SgAT-Ⅲ基因在毒液器官中高表达。SDS-PAGE电泳检测发现,成功表达SgAT-Ⅲ重组蛋白,纯化得到高纯度的重组蛋白。【结论】克隆得到SgAT-Ⅲ基因,其在毒液器官中高表达,纯化得到SgAT-Ⅲ重组蛋白,为进一步研究该毒液基因的生理功能奠定了基础。

摘要: 【目的】以生物导弹为理念,应用寄生性昆虫携带病原物双重防治松墨天牛Monochamus alternatus是目前研究的新领域,更是松材线虫病Bursaphelenchus xylophilus防治的新途径。【方法】本文以川硬皮肿腿蜂Scleroderma sichuanensis为载体,通过测定4株松墨天牛致病菌的孢子粉和孢子悬浮剂对其毒力大小和川硬皮肿腿蜂对4株菌的2种剂型的初始携带量及存留量,分析不同菌种与不同剂型对川硬皮肿腿蜂的影响和川硬皮肿腿蜂体表孢子脱落趋势。【结果】川硬皮肿腿蜂雌成蜂携带粉剂孢子的死亡率高于携带悬浮剂的,但川硬皮肿腿蜂对粉剂孢子的携带量却远远高于悬浮剂孢子的携带量。当喷施孢子悬浮剂时,川硬皮肿腿蜂的累计死亡率随浓度增加而增加,同样携带量也随浓度增加而增加;白僵菌对川硬皮肿腿蜂的毒力较绿僵菌高,致死速率也较绿僵菌大,但川硬皮肿腿蜂对白僵菌的携带效果却比绿僵菌的效果好。并且不论剂型和菌种,川硬皮肿腿蜂体表的孢子在第1d后都脱落最为明显,而后均保持较缓慢脱落。【结论】本研究证明川硬皮肿腿蜂携带松墨天牛致病菌的方法是可行的,其中白僵菌孢子粉更适合携带。

摘要: 【目的】筛选出适宜川硬皮肿腿蜂Scleroderma sichuanensis Xiao寄生的黄粉虫Tenebrio molitor饲料配方。【方法】用10种不同蛋白质含量的饲料饲喂黄粉虫,并观察各虫态生长繁殖情况,再用川硬皮肿腿蜂接种各配方黄粉虫蛹后置于培养箱中培养,5 d后计数雌蜂产卵量,并通过显著性分析、相关性分析及一元回归分析进行数据处理。【结果】各配方黄粉虫生长繁殖情况正常,指标间存在一定的显著性和相关性且与一元回归分析所得相关性一致。川硬皮肿腿蜂对黄粉虫蛹寄生率没有显著性,为86.25%96.97%,表现出较高寄生率。寄生产卵量较高且蛋白质含量为14.09%和13.73%配方组显著高于其他配方组。【结论】黄粉虫饲料中蛋白质含量在14%(13.73%14.09%)时川硬皮肿腿蜂寄生能力最强。

摘要: 【目的】本研究旨在通过克隆表达管氏肿腿蜂Scleroderma guani毒液丝氨酸蛋白酶同源物(serine protease homologue, SPH)基因SgSPH,探索其编码的毒液蛋白对寄主血淋巴酚氧化酶活性的影响。【方法】利用RT-PCR技术克隆管氏肿腿蜂毒液SgSPH基因的开放阅读框(ORF),采用生物信息学软件分析其基因序列结构特征;采用qPCR技术检测该基因在不同发育阶段(卵、低龄幼虫、高龄幼虫、老熟幼虫、吐丝幼虫、黄茧蛹、黑茧蛹和羽化后1-5 d成虫)和雌成虫不同组织(头部、胸部、去除毒液器官的腹部和毒液器官)中的相对表达量;利用载体pSUMO-Mut对该基因进行原核表达,用镍亲和层析柱纯化表达的重组蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot对获得的重组蛋白进行鉴定;用酶活性测定方法,分析SgSPH重组蛋白对寄主黄粉虫Tenebrio molitor蛹血淋巴酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】克隆获得管氏肿腿蜂毒液SgSPH基因(GenBank登录号:MT920663)的ORF,长798 bp,编码265个氨基酸,其中第1-20位氨基酸为信号肽,理论分子量为30.53 kD,等电点为9.59。多序列比对分析表明,SgSPH与其他寄生蜂毒液丝氨酸蛋白酶和SPH具有较低的氨基酸序列一致性(9%17%),且缺乏保守的催化三联体。qPCR分析表明,SgSPH基因在管氏肿腿蜂成虫阶段和毒液器官中高表达。SDS-PAGE电泳和Western-blot检测发现,成功表达SgSPH重组蛋白,并纯化得到了高纯度SgSPH重组蛋白。酶活性检测结果显示,SgSPH能抑制寄主黄粉虫蛹血淋巴的酚氧化酶活性。【结论】结果提示管氏肿腿蜂毒液SgSPH具有干扰寄主酚氧化酶级联反应的功能。

摘要: 【目的】硬皮肿腿蜂Sclerodermus spp.在寄生蜂中独有雌蜂合作繁育的准社会行为。本研究旨在明确该合作繁育行为在非自然寄主天牛上有何表现。【方法】随机选取松褐天牛Monochamus alternatus幼虫(体重范围0.160.44 g),个体称体重后分别接1, 2和4头已交配但尚未产卵的川硬皮肿腿蜂S.sichuanensis雌蜂即母蜂,观测母蜂产卵前期和子代发育表现等参数,分析寄主体重(连续自变量)和接蜂数(分类自变量)对这些参数的影响。【结果】对所有观测参数的分析未发现寄主体重与接蜂数这两因素之间存在互作影响,说明这两个因素独立影响观测特征。川硬皮肿腿蜂母蜂产卵前期随寄主体重增大而逐渐延长,但在母蜂数较多的情况下产卵前期缩短:接4头蜂处理下产卵前期比接1和2头处理下的产卵前期分别缩短18.3%和20.6%。按照母蜂平均产子代蜂数量(蜂均产蜂量)计算,接1头蜂处理下的蜂均产蜂量分别是接2和4头蜂处理下的蜂均产蜂量的1.5和3.3倍;蜂均产蜂量不受寄主体重的影响。子代蜂性比(雄蜂占比)在接蜂数较多处理下略有增大,但仍然极端偏雌;性比不受寄主体重的影响。子代卵至成虫存活率在接4头母蜂处理下最低,比接1和2头母蜂处理下分别降低37.4%和30.5%;子代卵至成虫存活率不受寄主体重的影响。子代蜂体型(后足胫节长度)随寄主体重增大而增大,但不受接蜂数的影响。【结论】本研究结果说明,在合作利用体型较大的非自然寄主时,母蜂数量比寄主体型大小对川硬皮肿腿蜂的合作繁育行为产生更大的影响。