摘要: 目的比较国产和进口两种胰蛋白酶对蛋白质的酶解效果,为后续蛋白质组学稳定研究提供依据。方法用超声破碎法提取羊肌肉组织总蛋白,经两种胰蛋白酶酶解后液相色谱串联质谱检测酶解肽段,将结果上传蛋白质序列数据库,利用质谱分析鉴定方法分析比较两种胰蛋白酶的酶解效果,并借助生物信息学工具对所得数据进行分析。结果两种胰蛋白酶酶解同种蛋白质样品产生的肽段长度86%以上均为6—18个氨基酸,适用于质谱检测。酶解后肽段产生的质量国产胰蛋白酶优于进口胰蛋白酶,国产胰蛋白酶比进口胰酶酶解可多鉴定到19%的蛋白质和34%的肽段。结论进口、国产的胰蛋白酶在酶解蛋白质方面均可用于质谱检测前蛋白质的酶解消化。但国产胰蛋白酶价格明显低于进口胰酶,更具应用优势。本研究为评价胰蛋白酶酶解效果提供了一种有效、全面的研究方法。

摘要: 小尾寒羊脊柱变化趋势与人的有很多相似之处,随着外科模型的发展,成为研究脊柱发病原因与治疗方法的重要实验用动物模型。在羊脊柱外科实验中,对羊进行气管插管可以保证呼吸道畅通、辅助呼吸、便于监测调控、减少术中牵拉对气管的损伤。羊气管的长度较猪长,而且其嘴开口度有限,插管难度相对较大,而市售气管插管长度又不够。笔者经多次尝试后,自制了气管插管。应用自制的气管插管及工具,进行插管时,应熟悉羊的呼吸系统生理解剖结构,采用正确的气管插管方法。笔者对文献进行检索,发现相关文献较少,因之对小尾寒羊麻醉、对羊仰卧位麻醉后气管插管、术中监测及术后护理等方面进行了总结,为实验人员提供参考。

摘要: 目的探讨氯胺酮复合戊巴比妥钠、丙泊酚在制备山羊椎体骨缺损模型中的麻醉效果及安全性。方法将18头海南本地山羊纳入研究,氯胺酮肌注进行麻醉诱导,使用氯胺酮复合丙泊酚、戊巴比妥钠静滴维持麻醉,制备山羊腰椎全椎体骨缺损并填入骨水泥的动物模型,观察麻醉及手术效果、生命体征和不良反应。结果所有动物手术均顺利进行,麻醉优良率为100%,无动物死亡,无胃胀、呕吐等不良反应。麻醉诱导期、麻醉期及苏醒期时长分别为(15.94±1.76、121.11±9.44、42.44±6.73)min。各麻醉分期内血氧饱和度、体温、呼吸在组间比较均无统计学差异(P>0.05)。麻醉期心率与麻醉前、诱导期及苏醒期相比下降,有统计学意义(P<0.05)。结论利用氯胺酮、戊巴比妥钠、丙泊酚复合静肌麻醉,麻醉深度及进程满意,能满足经前路腹膜后行腰椎全椎体骨缺损动物模型的实验操作,且具有术后动物苏醒快,不影响其生理功能,动物存活时间长等优点。

摘要: 目的 探究大鼠羊膜间充质干细胞及其外泌体的分离与鉴定方法，为其后续治疗应用奠定基础。方法(1)妊娠18 d SD大鼠，心脏注射400 IU/kg肝素，75%乙醇浸泡子宫，在0.9%氯化钠溶液中分离羊膜组织；(2)用0.75 mg/mL胶原酶和0.25%胰蛋白酶分步消化、应用α-MEM培养基(添加4 ng/mL成纤维生长因子)培养；(3)采用形态观察、表面标志物检测和免疫荧光染色进行鉴定；(4)超速离心法提取外泌体，透射电镜观察形态、BCA法测定蛋白浓度和流式细胞术检测表面标志物。结果 形态学观察发现干细胞贴壁生长，形态呈长梭形，细胞之间相互连接；流式细胞术检测干细胞表面抗原显示，CD29、CD90表达呈阳性，CD34、CD45表达呈阴性；细胞免疫荧光结果显示，Vimentin(波形蛋白)表达阳性。结果表明，分离得到的大鼠羊膜干细胞为间充质干细胞。透射电镜结果显示，超速离心法分离得到的外泌体形态完整、呈椭圆形，具有双分子层膜结构且大小均一，粒径平均(82.6±14.0)nm; BCA测定外泌体蛋白浓度为0.995μg/μL;流式细胞术检测表面蛋白显示CD9、CD63和CD81表达呈阳性。结论 采用胶原酶和胰蛋白酶分步消化法成功分离出大鼠羊膜间充质细胞，通过超速离心法成功提取大鼠羊膜间充质干细胞外泌体，为大鼠羊膜间充质干细胞及其外泌体的研究和应用奠定基础。

摘要: 为掌握龙羊峡水库外来鱼类组成现状、生态风险及高风险外来鱼类的潜在分布区,从而制定针对性的防控对策。本研究于2023年5、9、12月及2024年5、7月对龙羊峡水库及其周边黄河流域开展了系统野外实地考察,结合既有文献资料,系统梳理了该水库当前的鱼类组成特征及外来鱼类的生态类型,并采用AS–ISK工具对其外来鱼类进行了风险等级评估。同时以典型外来鱼类池沼公鱼作为研究对象,采用MaxEnt模型预测其在龙羊峡水库流域的潜在地理分布。结果显示:(1)本研究实地调查共采集到21种鱼类,隶属于4目6科16属,其中外来鱼类11种; IRI指数结果显示优势种鱼类有6种,其中外来鱼类占4种分别为:鲫(Carassius auratus)、麦穗鱼(Pseudorasbora parva)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、池沼公鱼(Hypomesus olidus)。(2)生态矩阵因子结果显示,外来鱼类主要以端位口(R=0.64)、产黏性卵(R=0.91)、杂食性(R=0.72)和底栖生活(R=0.45)为主,且大多数为定居性(R=0.73),适应静缓水环境(R=0.91)。(3) AS–ISK评估结果显示,高、中、低风险鱼类分别为5、2和4种,风险最高的5种鱼类依次为池沼公鱼、麦穗鱼、鲤、虹鳟、鲫。与历史数据对比并结合天气变化预测,外来鱼类种类将呈现持续增加的趋势。(4) MaxEnt模型的预测结果显示,池沼公鱼高风险分布区域主要集中在龙羊峡库区、刘家峡库区及两库区之间的黄河流域,龙羊峡水库库尾及以上为低风险区域。研究结果显示重点防范物种为池沼公鱼,重点防范区域为龙羊峡库区库尾,此结果可为黄河渔业高质量绿色发展提供数据支持和理论参考。