摘要: β_2-微球蛋白(β_2-microglobulin,β_2m)作为MHCⅠ类分子的亚基,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用。实验采用直接测序法从P0代尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的β_2m基因组序列中筛选到30个SNPs,其中1个SNP位于5?UTR,16个SNPs位于外显子区域(15个非同义突变位点,1个同义突变位点),9个SNPs位于内含子区域,4个SNPs位于3?UTR。利用snapshot分型法对F1代的102尾易感群体和102尾抗病群体进行基因分型,并通过Popgen32和PIC-CALC软件统计分析尼罗罗非鱼β_2m基因序列的SNPs的He、Ho、Ne和PIC等遗传参数,表明易感群体中7个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5),抗病群体中25个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5)。采用SPSS 23.0软件分析了30个SNPs在F1代2个群体中的基因型频率和等位基因频率,分析其与链球菌抗性或易感性状之间的相关性。结果表明:24个SNPs的基因型和等位基因频率与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性/易感性状显著相关(P<0.05)。通过连锁不平衡分析发现30个SNPs构成4个单倍块和14种单倍型。其中,4个单倍型与无乳链球菌抗性性状显著相关(P<0.05),4个单倍型与易感性状显著相关(P<0.05)。标签SNP分析发现,单倍块2中的4个SNPs和单倍块3中的13个SNPs彼此之间高度连锁(r~2>0.9),这意味着我们在β_2m基因中发现2个ht SNPs。研究筛选到的与链球菌抗性/易感性状相关的SNP位点及单倍型具有辅助尼罗罗非鱼抗链球菌病品种选育的潜力。

摘要: 为了探究脂肪酸对罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪细胞增殖和分化的影响,在体外培养罗非鱼前脂肪细胞,并在其增殖和分化过程中分别添加100μmol/L的棕榈酸(Palmitic Acid,PA)、油酸(Oleic Acid,OA),亚油酸(Linoleic Acid,LA)和α-亚麻酸(α-Linolenic Acid,LNA)进行处理。使用SRB(Sulforhodamine B)染色法和油红O染色法检测外源性脂肪酸对脂肪细胞增殖和分化的影响,Real-time q PCR检测增殖分化过程中基因表达情况。结果显示,在培养8d时,外源添加的不饱和脂肪酸可以促进罗非鱼前脂肪细胞增殖,并且增殖过程中增殖相关基因(c-fos和c-myc)、脂解相关基因(ATGL)和脂合成相关基因(PPARγ和CD36)的表达与对照组相比均显著提高(P<0.05)。此外,外源脂肪酸的加入可以抑制脂肪细胞的分化。棕榈酸的加入使得脂肪细胞中产生的脂滴面积较少,数量较多;分化过程中细胞的β氧化相关基因(CPT-1a)与对照组相比显著上调,而脂解相关基因(ATGL)则显著下调。外源性不饱和脂肪酸可以促进罗非鱼前脂肪增殖,而饱和脂肪酸主要抑制细胞分化。在增殖过程中,过量的脂肪酸先通过脂合成储存在胞内,再借助脂解等途径进行代谢,从而帮助细胞适应环境中高浓度的脂肪酸。而在分化过程中,添加外源脂肪酸,可能通过抑制脂肪细胞内的脂合成和脂解的发生,同时促进β氧化等方式来抑制脂肪细胞分化。

摘要: 为揭示尼罗罗非鱼Ikaros基因结构特征及其在抗病原感染中的免疫调控机制,实验采用RT-PCR和RACE方法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros的cDNA序列以及利用PCR和染色体步移技术克隆了Ikaros的基因组DNA序列,通过荧光定量PCR分析了Ikaros mRNA的组织分布及其对无乳链球菌感染的响应。结果表明,克隆的尼罗罗非鱼Ikaros基因组DNA为20454 bp,包括7个内含子和8个外显子,经可变剪接可形成6种不同的mRNA剪接异构体,其编码的氨基酸序列均具有Ikaros家族典型的锌指结构域且与硬骨鱼类Ikaros氨基酸序列同源性较高(70.6%—93.7%)。Ikaros基因在尼罗罗非鱼各组织中均有表达,在血液中的表达量最高,其次为胸腺、脾脏和头肾。人工感染无乳链球菌后,血液、胸腺、脾脏、头肾中Ikaros基因的相对表达量均显著上调,并在48h达到峰值,这表明Ikaros基因参与调控尼罗罗非鱼抵御无乳链球菌的免疫应答反应。研究可为进一步探索Ikaros基因在罗非鱼抗病原感染中的作用机制奠定理论基础。

摘要: 为研究水环境浓度四环素(Tetracycline, TC)长期暴露对鱼类的影响,实验以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验模型,将其暴露于0、400和800 ng/L三种四环素水平下10周。结果表明,相较于对照组,四环素暴露显著提高了生长性能,但增加了肝脏中甘油三酯含量和四环素浓度。脂肪生成基因表达(fas、scd、accα、srebp1和pparγ)被上调,但降低了与脂肪分解相关基因的表达(atgl、hsl、cpt1和pparα)。此外, 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、异柠檬酸脱氢酶(ICDH)、苹果酸脱氢酶(ME)及脂肪酸合成酶(FAS)的活性显著增加,但肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)活性则被显著抑制,这与基因表达相一致。而且,四环素暴露显著降低过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶的活性及总抗氧化能力,并诱导了鱼类的氧化应激,导致丙二醛水平显著增加。因此,与环境相关四环素浓度可促进吉富罗非鱼的生长性能、上调产脂代谢、降低抗氧化能力并诱导脂质过氧化。

摘要: 为探究水体中Cu~(2+)对罗非鱼(GIFT tilapia, Oreochromis niloticus)生长性能、肝胰脏脂代谢和脾脏免疫功能的影响,实验设置水体Cu~(2+)浓度分别为0(对照组)、0.2、0.4和0.8 mg/L,每个浓度处理组设置3个实验重复,选择初始体重为(0.45±0.02) g的健康罗非鱼幼体,随机分配至12个养殖缸中,进行4周的养殖实验。结果显示:(1)在水体Cu~(2+)胁迫下,罗非鱼的存活率、增重率和特定生长率均显著下降; 0.4和0.8 mg/L Cu~(2+)浓度组罗非鱼的肝体比显著高于对照组和0.2 mg/L处理组。(2) 0.4和0.8 mg/L处理组罗非鱼肝胰脏中甘油三酯含量显著高于对照组,但与0.2 mg/L处理组之间无显著差异;肝胰脏中总胆固醇含量与3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活力在各组间无显著差异。(3)在水体Cu~(2+)胁迫下,罗非鱼血清低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇含量和谷草转氨酶活力均显著上升;血清甘油三酯含量呈先下降后上升的趋势,且0.8 mg/L处理组含量显著高于0.2 mg/L处理组; 0.8 mg/L Cu~(2+)处理组罗非鱼血清谷丙转氨酶活力显著高于0.2和0.4 mg/L处理组,但与对照组无显著差异。(4)组织学结果表明,水体过量Cu~(2+)使罗非鱼肝胰脏组织空泡化现象严重,脂滴含量显著高于对照组;脾脏组织出现较大面积的巨噬细胞中心,且脂褐素含量显著增加。研究表明,水体Cu~(2+)暴露显著降低了罗非鱼生长性能,并导致肝胰脏和血清脂肪沉积,造成肝胰脏、脾脏损伤。研究为明确重金属环境下养殖鱼类腹腔脂肪蓄积及脾脏损伤机制提供了数据参考。