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摘要: 【目的】本研究旨在通过克隆绿盲蝽表皮蛋白(cuticular protein, CP)基因17、制备其多克隆抗体和分析其时空表达特性，为AlCP17蛋白功能的研究奠定基础，也为进一步解析绿盲蝽表皮发育过程中的信号通路图谱提供依据。【方法】基于前期转录组数据克隆绿盲蝽AlCP17的cDNA全长序列并进行生物信息学分析；构建AlCP17原核表达载体pCZN1-17并转化大肠杆菌进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白制备AlCP17蛋白多克隆抗体；qRT-PCR检测17在绿盲蝽不同发育阶段(1-5龄若虫和成虫)和3龄初期若虫不同组织(头、胸、足、中肠、脂肪体和表皮)中的表达谱。【结果】克隆获得绿盲蝽17全长cDNA序列(GenBank登录号: OM302231)，其开放阅读框长594 bp，编码197个氨基酸，预测蛋白分子量为21.69 kD，理论等电点为6.11。编码的蛋白质具有典型的表皮蛋白结构特征，含有节肢动物表皮蛋白几丁质保守结合域(non-cysCBD)，即Chitin_bind_4结构域；氨基酸序列比结果对显示，AlCP17与半翅目(Hemiptera)臭虫科(Cimicidae)温带臭虫的CPA2B-like的氨基酸序列一致性最高(76.29%)；系统发育进化树显示，CP是一种高度保守的蛋白，与温带臭虫的CPA2B-like和茶翅蝽的CP7-like相似性高。IPTG诱导获得原核表达重组蛋白AlCP17，经纯化后制备的AlCP17多克隆抗体纯化效果较好，可以用于后续实验。17在绿盲蝽不同发育阶段和3龄初期若虫不同组织中均有表达，在初孵1龄若虫中表达量达到峰值，且在若虫各龄期的末期表达量显著上升；在3龄初期若虫中肠中表达量最高。【结论】克隆了绿盲蝽17基因cDNA全长序列，AlCP17具有昆虫表皮蛋白的典型特征，17在绿盲蝽体内的表达具有发育阶段特异性和组织特异性。这些结果为今后研究这一蛋白在绿盲蝽表皮发育过程中的生理功能奠定了基础。

摘要: 【目的】优化绿盲蝽Apolygus lucorum体内植物DNA提取方法,为绿盲蝽寄主利用习性研究发展DNA分子追踪技术。【方法】首先分别利用CTAB法、两种试剂盒法提取绿盲蝽中肠内DNA样本,比较分析其中的棉花DNA检出率。其次,利用1%1.5%的次氯酸钠溶液漂洗绿盲蝽成虫,比较不同漂洗处理对绿盲蝽体表植物DNA的清除效率以及对体内棉花DNA检出率。【结果】不同提取方法对绿盲蝽中肠内棉花DNA检出率存在显著影响,其中CTAB法提取的中肠样本中棉花DNA的检出率最高。将绿盲蝽成虫在1%1.5%次氯酸钠中漂洗5 s,可清除成虫体表的植物DNA污染,且不破坏体内的棉花DNA;漂洗30 s后,体内棉花DNA检出率明显降低。【结论】本研究证实了利用整头绿盲蝽成虫代替其中肠提取的绿盲蝽DNA样本的可行性,并明确了成虫体内植物DNA高效提取的方法,为进一步利用DNA分子追踪技术研究绿盲蝽田间寄主选择与取食行为奠定了重要基础。

摘要: 【目的】集团内捕食是影响农业系统广食性天敌对靶标害虫控制作用的重要因素,全面揭示稻田广食性天敌对稻飞虱重要天敌黑肩绿盲蝽Cyrtorhinus lividipennis Reuter和中华淡翅盲蝽Tytthus chinensis(St?l)(半翅目:盲蝽科)的集团内捕食作用有助于更好地保护利用天敌。【方法】建立以两种盲蝽为猎物对象的种特异性二重定量PCR系统,检测比较不同抗性品种穗期田间主要捕食者对两种盲蝽的集团内捕食作用。【结果】(1)本研究建立的二重定量PCR具有的物种专化性,两种检测靶标灵敏度高且相似,可用于田间捕食者猎物分析;(2)感虫水稻品种上捕食者对盲蝽的捕食强度高于抗性水稻品种;不同种类捕食者对盲蝽的集团内捕食强度有显著差异;捕食者对黑肩绿盲蝽集团内捕食强度显著高于中华淡翅盲蝽。【结论】捕食性盲蝽在稻田生态系统遭遇集团内捕食,其集团内捕食强度与水稻品种抗性、捕食者种类和猎物丰富度有关。

摘要: 【目的】绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)上升为酿酒葡萄园区的主要害虫,并呈现出逐年加重的态势,发展绿盲蝽无公害监测和综合管理技术成为构建品质优良、食用安全的葡萄酒产业中的重要环节。【方法】就此本文系统调查了河北昌黎华夏长城酿酒葡萄种植园区绿盲蝽全年种群发生动态,并对其主害代及监测预警技术进行了探讨;进一步分析了葡萄园内优势天敌的发生规律,以及其对绿盲蝽的跟随趋势及控制作用。【结果】结果表明:绿盲蝽在酿酒葡萄园区全年仅出现两个发生高峰期,分别为葡萄生长前期和后期,其越冬代为主害代,抓好越冬代的防治工作是降低酒葡萄受害的关键;对田间主要天敌种群动态进行分析,发现捕食性天敌对绿盲蝽的跟随现象虽不明显,但仍有一定的控制作用;采用物候监测法、温度指标监测法、粘虫板诱集监测法等对酒葡萄园区绿盲蝽越冬代和第3代成虫发生期进行监测,效果均较可靠。【结论】综合分析认为,酿酒葡萄园区绿盲蝽的发生规律与其他大田作物明显不同,因此,在其综合管理措施的制定上也应体现差别:建议4月下旬―5月下旬对越冬代卵、成若虫进行重点监测和综合防治;8月下旬于田间设置粘虫板诱集成虫,可显著减轻绿盲蝽对酿酒葡萄的危害。