摘要: 红耳龟(Trachemysscriptaelegans)是世界上最危险的100种入侵物种之一,该种对环境适应能力极强。目前尚未见有关红耳龟细胞体外培养的研究报道,本研究旨在探索和建立快速稳定的红耳龟胚胎成纤维细胞分离培养体系,为进一步从细胞层面研究红耳龟对极端环境的耐受机制提供材料和方法支撑。本研究取发育至13或14期的红耳龟胚胎,采用酶消化法和差速贴壁法获得红耳龟胚胎成纤维细胞,在体外进行原代培养和传代培养;采用噻唑蓝(MTT)比色法分别绘制红耳龟胚胎成纤维细胞在不同温度、接种浓度和血清浓度下的生长曲线;采用反转录PCR对培养的红耳龟胚胎成纤维细胞进行分子水平的鉴定;采用脂质体转染法对红耳龟胚胎成纤维细胞进行基因转染。结果表明:1)红耳龟胚胎成纤维细胞呈典型的梭形、不规则星形或多边形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱,随着传代次数的增加,细胞体积增大,梭形细胞有拉长趋势,细胞可至少传至15代;2)红耳龟胚胎成纤维细胞在3034℃条件下的生长状态良好,其生长速率随着温度的升高而增高;其接种密度不宜低于1.25×104个/cm2;其最佳血清浓度为10%;3)反转录PCR检测到成纤维细胞标记基因vim和acta2在红耳龟胚胎成纤维细胞中表达;4)脂质体转染法可以介导外源绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白进入到红耳龟胚胎成纤维细胞内表达,转染效率约为30%。本研究成功地在体外分离培养了红耳龟胚胎成纤维细胞,该细胞系可应用于外源基因转染和表达。

摘要: 设置3个盐度处理组(5‰盐度组、10‰盐度组和15‰盐度组,后面简称盐度5组、盐度10组和盐度15组)和一个对照组(以等体积经曝晒处理的自来水作为对照组)研究红耳龟(Trachemys scripta elegans)肌肉中游离氨基酸以及血液和肝中可溶性蛋白含量在急性盐度胁迫0 h、24 h和96 h的变化情况。结果显示,在24 h和96 h时,盐度组红耳龟肌肉中总游离氨基酸含量显著高于对照组(P<0.05),并且在红耳龟肌肉中天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸含量最为丰富。在不同取样时间下,谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸和甲硫氨酸的含量在3个盐度处理组间均没有显著差异(P>0.05);但在不同盐度组中天冬酰胺、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸和天冬氨酸含量随着时间的延长均上升。通过主成分分析发现,起主要作用的游离氨基酸是丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和甘氨酸。方差分析发现,丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和组氨酸对盐度和时间均响应显著(P<0.05),且盐度和时间之间存在显著的交互作用(P<0.05)。在24 h和96 h时,盐度10组和盐度15组血液中可溶性蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05);而盐度5组肝中可溶性蛋白含量在24 h时显著高于对照组(P<0.05),在96 h时显著低于对照组(P<0.05)。结果表明,在急性盐度胁迫下,红耳龟可以通过肌肉中氨基酸的代谢以及血液和肝中可溶性蛋白的分解,产生游离氨基酸进入到血液中以维持机体的渗透压平衡。研究结果为红耳龟外来入侵生理适应机制的研究提供了重要参考,并进一步完善了对龟类渗透压调节机制的认识。

摘要: 为研究红耳龟(Trachemys scripta elegans)生理入侵机制,本研究选用本土中华条颈龟(Mauremys sinensis)为参照,对孵卵温度在(29±0.3)℃、湿度为﹣220 k Pa条件下孵出的初生幼体进行表型特征及运动能力的测量,禁食条件下分别在孵出第0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、240 h时随机取10只个体解剖,分离出剩余卵黄并测量干重,比较研究两种龟初生幼体剩余卵黄的消耗、表型特征及运动能力。结果,(1)两种龟初生幼体剩余卵黄的消耗:刚孵出的红耳龟剩余卵黄含量(20.5%)显著高于中华条颈龟(5.2%);中华条颈龟经禁食72 h后剩余卵黄量仅占3.4%,至96 h已基本吸收完全,而红耳龟经禁食96 h后剩余卵黄量仍可达到11.9%,全部被吸收所用时间约为31 d。这说明红耳龟幼体孵出后剩余卵黄较多,耐饥力强。(2)两种龟初生幼体表型特征:中华条颈龟孵出1 h内体重为(7.07±1.21)g(n=30),红耳龟为(9.45±1.04)g(n=42),二者存在极显著差异(t=8.933,df=70,P<0.001)。以初始体重为协变量的方差分析结果表明,红耳龟初生幼体背甲长和头高显著大于中华条颈龟初生幼体,尾长却显著小于中华条颈龟,而体高、背甲宽、腹甲长、头长和头宽差异不显著。(3)室温条件下(约28℃)运动能力:中华条颈龟初生幼体的最大持续运动距离为(80.3±14.4)cm,运动过程中停顿次数为(5.6±0.3)次/min;红耳龟初生幼体的最大持续运动距离为(29.8±11.7)cm,停顿次数为(4.0±0.2)次/min;中华条颈龟和红耳龟初生幼体游完1 m泳道所用时间分别为(32.8±4.3)s和(61.2±7.2)s。因此,与本土中华条颈龟相比,红耳龟初生幼体个体较大,剩余卵黄较多,运动能力欠佳。研究结果为红耳龟外来入侵的生理适应机制研究提供了参考,并为龟类的卵内繁殖投入研究提供了基础数据。

摘要: 为了解外来物种红耳龟(Trachemys scripta elegans)在海南入侵区的适宜栖息地特征,本文采用野外调查,结合3S技术(GIS、GPS和RS)和因子筛选的方法对海南万泉河琼海段红耳龟的生境选择进行了研究,并对该区域红耳龟生境适宜性及空间分布进行了分析。研究结果表明,红耳龟喜好选择在海拔015 m、人为干扰距离在200400 m的水域且离水源距离不超过100 m的人工林区域栖息。GIS分析表明,2009年海南万泉河琼海段红耳龟的适宜生境面积达95.13 km2,占研究区总面积的5.66%;较适宜生境达153.32 km2,占研究区总面积的9.12%;不适宜生境1 432.58 km2,占研究区总面积的85.22%。通过对该区域红耳龟生境的适宜性分析研究,为有效防治和管理红耳龟的入侵、扩散提供基础数据及科学依据。

摘要: 2010年7月至2011年4月、2011年8月至2012年8月,在海南万泉河琼海段,应用无线电遥测技术研究了外来物种红耳龟(Trachemys scripta elegans)和本地种中华条颈龟(Mauremys sinensis)的家域。采用最小凸多边形法和线家域法计算了所有个体的家域大小和不同个体间家域的重叠状况。结果表明:(1)红耳龟和中华条颈龟的家域面积分别为(8.15±2.83)hm2、(5.82±3.95)hm2,线家域分别为(534.07±74.98)m、(504.00±222.96)m;(2)两种龟的家域面积和长度均无种间差异;(3)成年雌性红耳龟的家域面积和长度显著大于雄性;(4)红耳龟和中华条颈龟家域的种内重叠度分别为0.27±0.02、0.08±0.06,并且红耳龟家域的种内重叠度显著大于中华条颈龟;(5)红耳龟与中华条颈龟家域的种间重叠度为0.20±0.02。本文研究结果提示,红耳龟在野外对本地种中华条颈龟具有潜在的竞争威胁。