摘要: 报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV)极为敏感 ,增殖AcMNPV多角体平均每个细胞达86个 ,表达由AcMNPV构建的重组蛋白的水平较高 ,β 半乳糖苷酶的表达水平为 ( 2 2 5 5± 13 4 )IU mL ;碱性磷酸酶的表达水平为 ( 4 7± 0 61)IU mL ,是一株高水平表达重组蛋白的传代细胞系 ,命名为HNU Tn FB1。

摘要: 将粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增效基因 3′端 2 5kb片段插入 pQE 31中构建了重组表达载体 pQE/enhancin ,转化大肠杆菌M 15( pREP4 )在IPTG诱导下成功表达出分子量约为96kD的融合蛋白并命名为P96。初步纯化的P96显示了明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核型多角体病毒对棉铃虫 3龄幼虫感染死亡率 2 7 4 0 % 34 50 % ,缩短LT50 1 9天以上

摘要: 构建含中华蜜蜂溶血肽基因的重组转移载体pBacHT_GFPTAccM,转化受体菌DH10Bac,得重组穿梭载体Bacmid_GFPTAccM,Lipofectin介导其基因组DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4。SDS_PAGE分析表明,感染重组杆状病毒Bacmid_GFPTAccM的细胞表达产物在约为34kD处出现特异性条带,其表达量约占细胞总蛋白的3%。Westernblotting和细胞表达时相动态分析证明中华蜜蜂溶血肽基因已在粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4中进行了成功的表达。

摘要: 设计简并引物 ,采用RT PCR方法对粉纹夜蛾Trichoplusiani(H櫣ｂｎｅｒ)细胞系BTI TN 5B1 4的氨肽酶N(aminopeptidaseN ,APN)基因cDNA片段进行了克隆和序列分析 ,通过两对引物扩增出了两种氨肽酶N基因的cDNA片段 ,大小分别为 188bp和5 6 4bp ,分别命名为AS188(GenBank登录号 :CD80 932 4 )和AS5 6 4 (GenBank登录号 :CD80 932 6 )。对这两个片段推导的氨基酸序列进行同源性分析 ,结果表明两者与已报道的鳞翅目昆虫中肠的Cry1Ac毒素受体氨肽酶N有较高的同源性

摘要: 利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni Hbner卵细胞系(Hi-5细胞系)在细胞水平研究了印楝素(azadirachtin)A杀卵活性的毒性机理。以MTT法研究了印楝素A对粉纹夜蛾Hi-5细胞的生长抑制率,结果表明最初两天印楝素A对Hi-5细胞无较明显活性,但随后几天抑制率显著增加。用Giemsa染色法对细胞进行染色,观察细胞形态发生的变化,发现:1.25μg/mL印楝素A处理Hi-5细胞1d后,细胞已无法贴壁,形状变圆,接着细胞形态变得极不规则,有凋亡小体出现。用Ho33342染料对Hi-5细胞核DNA染色,通过荧光显微镜观察发现:经印楝素A处理后第1天,部分细胞核染色体发生异常凝聚,此后异常细胞核比例增多,核膜严重破损。以异硫氰酸荧光素(FITC)荧光染料研究了Hi-5细胞的蛋白质含量变化,发现1.25μg/mL印楝素A处理Hi-5细胞1d后,细胞蛋白质指数(DI)为1.070±0.018,至第3dDI值上升到1.912±0.019。分析了印楝素A处理后Hi-5的还原性谷胱甘肽(GSH)的相对含量变化,发现1.25μg/mL处理浓度下,各天处理组GSH抑制率有显著差异。结果显示印楝素A能够抑制Hi-5细胞增殖,影响细胞骨架正常功能,降低细胞活力。