摘要: 采用微卫星分子标记技术对海南近海点带石斑鱼野生和养殖群体的遗传变异进行了研究.实验所用点带石斑鱼分别于2005年6月和9月取自海南万宁石斑鱼养殖基地和三亚近海,均为20尾,取全血以酚-氯仿抽提方法提取基因组DNA,利用微卫星引物进行PCR扩增,反应产物经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染显色,并计算了相应的遗传学参数.结果表明,在野生和养殖群体中,7个基因座位的等位基因平均数(A)分别为3·29和3·29,每个基因座位有效等位基因数(ae)分别为1·90~3·68和1·83~4·06,野生和养殖群体平均杂合度(Ho)分别为0·7904和0·8337;两个群体间的遗传相似性系数为0·8325,遗传距离为0·1834.由此可知,点带石斑鱼野生群体的等位基因数、平均有效等位基因数等于养殖群体,而杂合度两群体相当(P=0·637>0·05),说明海南近海点带石斑鱼野生和养殖群体的种质资源较好.

摘要: CD4作为TCR的共受体可以提高TCR/抗原-MHC复合体的稳定性,辅助TCR识别抗原,并且参与T细胞活化。本研究从斜带石斑鱼Epinepheluscoioides头肾中克隆得到全长2240bp的CD4cDNA序列,该序列包含长1410bp的ORF,编码469个氨基酸,预测蛋白分子包含一段信号肽,4个Ig样区(D1～D4),一个疏水跨膜区和一段胞浆区,具有鱼类CD4典型的结构特征。同源比对显示,其推测的氨基酸序列与其他鱼类CD4氨基酸序列相似性为25%～51%,与人Homo sapiens和鼠Mus musculus的CD4氨基酸序列相似性为13%～15%。RT-PCR分析显示,斜带石斑鱼CD4在脾脏中表达量最高,其次是胸腺和头肾。受刺激隐核虫Cryptocaryon irritans感染后,斜带石斑鱼鳃和皮肤中CD4表达量并没有显著变化(P<0.05),头肾和脾脏CD4表达量在感染5d后显著升高(P<0.05),第7d再次回落。说明刺激隐核虫感染可引起头肾和脾脏CD4+T细胞的增殖,预示头肾和脾脏CD4+T细胞在宿主对刺激隐核虫感染的抗力机制中可能发挥着重要作用。

摘要: 为探究经枯草芽孢杆菌发酵中草药蒲公英的产物对石斑鱼生长性能、非特异性免疫力、抗氧化能力和肠道健康的影响,以珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatu♂)为研究对象,分别投喂普通饲料(对照组)和添加发酵中草药的饲料(添加组),养殖56d后采集血液、肠道内容物、肝脏等组织样品,对生长性能、肠道菌群、生化酶活性、代谢和炎症基因表达水平等各项指标进行检测分析。结果显示,中草药蒲公英发酵添加剂显著提高石斑鱼的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、肥满度(CF)、美人鱼发光杆菌感染的存活率(P<0.05),而显著降低饲料系数(FCR)(P<0.05)。添加组的石斑鱼肠道的脂肪酶(P<0.01)和蛋白酶活性(P<0.05)均显著提高;同时降低了石斑鱼肠道的脂肪酸合成基因的表达,提高了糖酵解的发生和脂质分解基因的表达。添加组的肠道菌群Ace指数和Chao1指数显著提高(P<0.05),肠道微生物代谢和生物合成相比对照组呈现显著上调(P<0.05);添加组的肠道超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原性谷胱甘肽(GSH)及肠道溶菌酶(LZM)均显著提高(P<0.05);同时降低石斑鱼肠道的炎症因子表达、提高肠道抗炎因子的表达,减少凋亡因子的表达。中草药蒲公英发酵添加剂极显著降低了石斑鱼血清中谷丙转氨酶(ALT)活性、极显著提高血清中溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性(P<0.01)。中草药蒲公英发酵添加剂显著提高了石斑鱼肝脏中还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)活性(P<0.05),极显著提高总抗氧化能力(T-AOC; P<0.01);提高肝脏的糖酵解功能,降低脂肪酸的合成和促进脂肪的分解,以及将降低石斑鱼肝脏的炎症因子的表达、提高抗炎因子的表达,同时减少凋亡因子的表达。在石斑鱼饲料中添加适量的枯草芽孢杆菌发酵中草药蒲公英产物,可促进鱼体生长,增强鱼体的非特异性免疫力和抗氧化能力,提高抗病原感染的能力;增加潜在有益菌种类和丰度,保障肠道健康。

摘要: 为探讨鱼类电晕休眠低温无水保活新技术,研究采用单因素实验与响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼的电晕诱导休眠工艺参数,探讨电晕休眠无水保活及复苏后鱼体的生化响应、氧化应激指标及能量代谢的变化规律。结果表明,珍珠龙胆石斑鱼在电压为126 V、电击时间为5s、温度为18℃的条件下,在15℃下的无水存活时间最长,可达到(15.92±0.3)h。鱼体电晕休眠后,随着无水保活时间的延长,血清葡萄糖(GLU)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性显著增加(P<0.05);脑组织中氧化应激指标谷胱甘肽S转移酶(GST)活性和热休克蛋白70(HSP70)的含量显著提升(P<0.05),相比于对照组,分别增加了54.33%和22.46%。在此过程中,低温无水保活胁迫下脂质过氧化物MDA和ROS的产生受到明显抑制,说明鱼体通过提高GST的活性和HSP70的含量可以缓解保活过程中的氧化应激反应,激活了鱼体在应激过程中抗氧化防御机制。此外,电晕休眠处理,鱼体的糖原含量显著提高(P<0.05),以抵御无水保活过程中能量的消耗,维持鱼体的能量代谢平衡。进行复苏后,鱼体可以维持至与对照组相当的较低代谢水平。电晕休眠技术有效延长了珍珠龙胆石斑鱼的存活时间,通过提高抗氧化能力增强了其对环境胁迫的耐受性,为水产运输提供了一种高效、低成本且环境友好的解决方案,为鱼类的活体运输提供新模式。

摘要: 从斜带石斑鱼垂体提取总RNA ,再取其 5 0ng合成SMARTcDNA。从所构建的垂体SMARTcDNA质粒文库中筛选到生长激素 /催乳素基因家族的 2个成员的全长cDNA片段 :生长激素 (GH )基因全长为 938bp ,编码 2 0 4个氨基酸 ;催乳素基因 (PRL)全长为 14 2 9bp ,编码 2 12个氨基酸。采用计算机软件Mega 2和CLUSTALW1 6 4b对 9种鱼的生长激素 /催乳素基因家族的 3个成员 (GH、PRL和生长催乳素SL)的氨基酸序列进行系统分析 ,构建NJ分支系统树 ,对于序列中的插入 /缺失位点则采用PairaiseDeletion ,10 0 0次自展(Bootstrap)分析计算各节点支持率。根据 3个基因的氨基酸序列构建的系统树表明 ,石斑鱼与金头鲷、金鲈和牙鲆聚成一类 ,虹鳟与大马哈鱼聚成一类 ,鲫鱼与鲶鱼聚成一类 ,鳗鲡成另外一类。根据石斑鱼全长cDNA推断的氨基酸序列比较表明 ,SL相对GH和PRL有较高的保守性。石斑鱼的GH、PRL和SL的氨基酸同源性在2 4 %～ 31% ,但其C -端的氨基酸同源性较高 ,尤其是C -端的 3个Cys是严格保守的。其中SL与GH的同源性 (30 8% )高于与PRL的同源性 (2 5 6 % ) ,GH和PRL的同源性最低 (2 4 1% )。