摘要: 将斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)生长激素成熟多肽cDNA序列克隆到质粒pRSET ,与 6x组氨酸等原核编码序列融合获得重组质粒pRGH6 ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得高效表达 ,表达量占细菌总蛋白的4 3%。免疫印迹证明表达产物为含斜带石斑鱼生长激素的融合蛋白 ,Ni2 +亲合层析柱纯化融合蛋白 ,以此为抗原免疫家兔制备特异性的抗血清。以纯化的重组生长激素和特异性的抗血清建立斜带石斑鱼生长激素的放射免疫测定法 ,该方法的灵敏度、特异性和重复性均达到测定血液生长激素的水平。研究了多巴胺的受体激动剂阿扑吗啡对静态孵育斜带石斑鱼脑垂体碎片释放生长激素的影响 ,结果表明 ,阿扑吗啡能以剂量依存方式促进斜带石斑鱼垂体释放生长激素

摘要: 石斑鱼因其种类繁多、分布广泛及缺乏显著的形体特征,使其系统分类的研究颇为困难。为探讨中国近海石斑鱼类的系统进化关系,通过PCR扩增获得了石斑鱼亚科(Epinephelinae)6属30个种类的线粒体16SrDNA基因片段序列。采用多个生物软件对序列变异和碱基组成进行分析,计算了Kimura2parameter遗传距离、转换/颠换比等遗传信息指数,并结合GenBank石斑鱼属的同源序列,以多纹长尾(Pronotogrammusmultifasciatus)和皮氏叫姑鱼(Johniusbelengerii)为外群构建NJ、MP和ML系统树。根据所得分子依据并结合形态学特征,推论如下:1)在本研究的30种石斑鱼中,鳃棘鲈属(Plectropomus)最先分化,并呈明显单系性;九棘鲈属(Cephalopholis)是一个单系群,并且较石斑鱼属(Epinephelus)原始;侧牙鲈属(Variola)的进化地位介于鳃棘鲈属与九棘鲈属之间;2)宽额鲈(Promicropslanceolatus)可以归入石斑鱼属,而驼背鲈(Cromileptesaltivelis)也与石斑鱼属有很近的亲缘关系,甚至可能是石斑鱼属内的特化类群;3)石斑鱼属内部存在两个平行进化的姐妹分支,分支内部的种类组成与地理分布无关,暗示了石斑鱼属早期的分化模式。

摘要: 采用腹部埋植法,应用连续组织切片技术、放射免疫测定方法和半定量RT-PCR技术,检测了间隔30d3次埋植不同剂量(高剂量H:100μg/g体重,低剂量L:10μg/g体重)的雄烯二酮(4-androstene-3,17-dine,ADSD)诱导2龄赤点石斑鱼性腺发育过程中血清性类固醇激素含量、芳香化酶表达和活性的变化。结果显示:第1次埋植ADSD后30d即可诱导雌性赤点石斑鱼发生不同程度的性逆转,性腺成熟指数明显下降,性腺中卵细胞退化,精原细胞增殖,出现大量精母细胞和精子细胞,第1次埋植ADSD后30d经轻微挤压腹部有10%(低剂量组)和15%(高剂量组)的鱼可排精;第2次埋植后30d明显提高性逆转效果,排精率分别达到80%和86·7%,性逆转雄鱼的精巢在组织结构上与正常雄鱼精巢一样,精子活力与正常雄鱼相同,对照组鱼卵巢发育良好;第3次埋植后30d排精率分别为90%和80%,埋植ADSD后性腺芳香化酶(P450aromA)表达和活性显著降低,脑芳香化酶(P450aromB)表达显著升高,前脑芳香化酶活性显著升高,血清T,11-KT水平显著高于对照组,而血清E2水平先升高,然后逐渐降低。说明血清T,11-KT水平增加,性腺芳香化酶表达及活性降低在控制雌雄同体的赤点石斑鱼的性转化和精子发生中起重要作用[动物学报52(2):316-327,2006]。

摘要:

摘要: 以赤点石斑鱼 (Epinephelusakaara)脑垂体中提取的RNA为模板 ,根据芳香化酶的保守序列设计引物 ,利用GeneRacerTM 技术 ,克隆出两种芳香化酶即脑芳香化酶 (P4 5 0aromB)和性腺芳香化酶 (P4 5 0aromA)的cDNA ,其全长分别为 190 1bp (编码 5 0 9aa)和 1833bp (编码 5 18aa)。序列分析结果表明 ,赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA序列的同源性为 5 1 6 % ,氨基酸序列之间同源性为 6 2 5 % ,与斜带石斑鱼两种芳香化酶氨基酸同源性分别为 94 7%和 97 9%。对 8个科的 10种鱼进行了分子系统进化树分析 ,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。以特异性引物扩增雌、雄赤点石斑鱼各种组织 (垂体、嗅球、端脑、下丘脑、中脑、后脑、延脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、性腺、鳃、胃、肠、皮肤、脂肪、肌肉、头肾、胸腺、鳔 ) ,以β actin作内标比较各组织芳香化酶基因表达量的差异 ,结果表明 ,赤点石斑鱼脑芳香化酶 (P4 5 0aromB)有广泛的组织分布 ,脑和垂体的表达量很高 ,各组织表达量有明显的雌、雄差异 ;而性腺芳香化酶 (P4 5 0aromA)表达主要集中于垂体和性腺 ,且不论雌雄 ,其性腺表达量均高于脑垂体 ,和P4 5 0aromB的表达模式明显不同 ,表现为在脑部 ,P4 5 0aromB表达量高于P4 5 0aromA ,而在性腺 ,