摘要: 【目的】克隆绿盲蝽Apolygus lucorum核受体基因E75D全长,明确其表达谱,并获得该基因的重组蛋白及制备其单克隆抗体。【方法】利用RACE法克隆绿盲蝽核受体基因Al E75D全长;qRTPCR法分析绿盲蝽不同日龄成虫(1-16 d)及7日龄雌成虫6种组织(脂肪体、飞行肌、卵巢、马氏管、中肠和表皮)中该基因的mRNA相对表达水平;利用NdeⅠ和XbaⅠ双酶切含有目的基因的p MD18-T载体后进行亚克隆,再利用IPTG诱导的重组质粒进行特异性表达重组蛋白,通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析纯化靶蛋白;最后通过小鼠免疫、细胞融合及腹水制备重组蛋白的单克隆抗体,Western blot验证该抗体的特异性。【结果】从绿盲蝽中克隆获得蜕皮激素核受体基因Al E75D(Gen Bank登录号:KX912700),其开放阅读框长1 911 bp,编码636个氨基酸,预测分子量为75.68 k D;该基因编码蛋白具有E75D的典型特征,由A/B域(23 aa)、D域(85 aa)、E域(190aa)和F域(338 aa)组成,但缺失C域;绿盲蝽Al E75D的氨基酸序列与半翅目蝽科的豆荚草盲蝽Lygus hesperus的E75D序列一致性最高(为98%)。Al E75D在整个绿盲蝽成虫期均有表达,在7日龄雌成虫中达到峰值;此外,Al E75D在雌成虫6个供试组织中也均有表达,并在脂肪体及卵巢中高表达。双酶切后的重组克隆载体可成功亚克隆到p Czn1载体上,IPTG可成功诱导p Czn1-Al E75D重组质粒特异性表达一个约75 k D的蛋白。用Ni-NTA琼脂糖树脂凝胶纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原,获得了一株能稳定传代并分泌抗Al E75D蛋白单克隆抗体的细胞株,该单克隆抗体可与绿盲蝽总蛋白及Al E75D重组蛋白特异性结合。【结论】Al E75D在绿盲蝽体内的表达谱表现出发育阶段特异性和组织特异性;本研究获得的其重组蛋白的单克隆抗体具有高特异性。结果为进一步在蛋白水平上分析该基因的功能奠定基础。

摘要: 【目的】绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)是我国Bt棉田内一类重要的刺吸性害虫。有机磷类和菊酯类杀虫剂因其对绿盲蝽具有较高的触杀毒力,是当前Bt棉田内广泛应用的杀虫剂,而新烟碱类杀虫剂因其较低的触杀毒力而没有被推荐使用。但在田间试验中,用新烟碱类杀虫剂处理棉种能够有效减少苗期至开花期绿盲蝽的危害。因此,亟待需要一种准确的毒力测定方法,以重新评价新烟碱类杀虫剂对绿盲蝽的毒力。【方法】本研究在成功研制绿盲蝽人工饲料的基础上,应用瓶膜法和人工饲料混合法两种毒力测定方法测定比较了5类16种杀虫剂对绿盲蝽3龄若虫和成虫的毒力。【结果】应用瓶膜法,新烟碱类杀虫剂对绿盲蝽成虫和若虫的LC_(50)值在337.97496.03μg/mL范围内,显著高于其他类型的杀虫剂(LC_(50)值范围在0.28207.26μg/mL)。然而,应用人工饲料混合法,新烟碱类杀虫剂对绿盲蝽成虫和若虫的LC_(50)值在0.011.08μg/g,与其他类杀虫剂LC_(50)值相等甚至低于其他类杀虫剂。【结论】结果表明新烟碱类杀虫剂对绿盲蝽的胃毒毒力显著强于它的触杀毒力,可用于绿盲蝽的田间防治。推荐人工饲料混合法作为监测绿盲蝽对新烟碱类杀虫剂抗性发展的一个替代方法。

摘要: 【目的】研究葡萄品种的抗性对于绿盲蝽Apolygus lucorum综合防控策略的制定具有重要意义。本研究检测了不同葡萄品种对绿盲蝽的抗性水平,分析了叶片中可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素含量与其对绿盲蝽抗性的关系,以明确不同葡萄品种对绿盲蝽的抗性机理。【方法】以9个葡萄品种(巨峰、玫瑰香、红地球、红宝石、藤稔、赤霞珠、蛇龙珠、霞多丽和品丽珠)为材料,通过连续3年的田间抗性鉴定确定这些葡萄品种对绿盲蝽的抗性水平;分别采用考马斯亮蓝法、蒽酮比色法和乙醇提取法测定不同葡萄品种叶片中可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素的含量,并通过线性回归法分析这些物质含量与葡萄对绿盲蝽抗性的关系。【结果】不同葡萄品种对绿盲蝽的抗性水平不同,按抗性指数从小到大依次为红地球、玫瑰香、巨峰、赤霞珠、品丽珠、红宝石、蛇龙珠、藤稔和霞多丽;不同葡萄品种叶片中可溶性蛋白、可溶性糖和叶绿素含量存在差异;可溶性蛋白和叶绿素含量与抗性指数之间没有显著相关性,而可溶性糖含量与抗性指数之间存在显著负相关(P<0.05)。【结论】不同葡萄品种对绿盲蝽的抗性存在显著差异,藤稔和霞多丽对绿盲蝽具有较高抗性,而红地球、玫瑰香和巨峰则较为敏感,该差异可能与葡萄叶片中可溶性糖的含量有关。

摘要: 【目的】为了预测和分析稻飞虱的两种重要捕食性天敌中华淡翅盲蝽Tytthus chinensis和黑肩绿盲蝽Cyrtorhinus lividipennis的潜在分布区,研究气候环境因素对其潜在分布的影响。【方法】Max Ent是以最大熵理论为基础的预测物种地理分布的模型,本文运用Max Ent模型,根据这两种盲蝽的已知分布区及其气候环境影响因素,推测这两种盲蝽的适生性分布及气候环境因素的影响。【结果】中华淡翅盲蝽主要适宜分布区域为中国秦岭-淮河以南地区、东北亚的朝鲜半岛和日本、东南亚以及菲律宾和印度尼西亚群岛部分地区,即东洋区和大洋区北部群岛;黑肩绿盲蝽适宜分布区比中华淡翅盲蝽更广,可达山东、河北以南,陕西、云南、贵州以东的中国大部地区,海外除中华淡翅盲蝽分布区外,也可分布于南美亚马逊雨林地区。研究还发现,最热季度降雨量、平均日温差对中华淡翅盲蝽、黑肩绿盲蝽适宜性分布有重要影响;夏季降雨量大于500 mm、平均日温差低于10℃,有利于这两种盲蝽的分布。【结论】两种捕食性盲蝽适宜生境主要受最热季度降雨量、平均日温差影响。本研究为发挥这两种捕食性盲蝽在害虫生物防治中的作用提供了重要依据。

摘要: 【目的】为了明确绿盲蝽Apolygus lucorum乙酰胆碱酯酶-2(acetylcholinesterase-2,ACh E2)与毒死蜱抗性的关系。【方法】本研究利用RACE技术获得了绿盲蝽ACh E2基因(Al-ace2)的全长序列,并检测了Al-ace2在绿盲蝽毒死蜱抗性品系(BZ-R)及敏感品系(SLF和BZ)中的氨基酸序列多态性及mRNA相对表达量。【结果】Al-ace2开放阅读框长1 935 bp,编码644个氨基酸残基;推导的氨基酸序列含有ACh E的典型结构,如催化三联体、氧阴离子洞、胆碱结合位点及围绕活性位点丝氨酸的保守结构域FGESAG。与两个敏感品系(SLF和BZ)相比,绿盲蝽毒死蜱抗性品系BZ-R Al-ace2基因中存在T552M氨基酸替换,发生频率为5%,但此位点氨基酸并不保守,也不靠近活性位点,推测其与抗性无关。在绿盲蝽SLF,BZ和BZ-R品系中,Al-ace1表达量均约为Al-ace2的3倍,且Al-ace2转录水平在3个品系间无显著差异。【结论】结果说明,在绿盲蝽体内ACh E2是次要表达的乙酰胆碱酯酶,该ACh E2可能与绿盲蝽BZ-R品系对毒死蜱的抗性无关。