摘要: 目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 ,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供科学依据

摘要: 为探讨疟原虫感染过程中IFN γ对巨噬细胞合成NO的诱导作用 ,我们应用Griess反应检测了约氏疟原虫感染小鼠脾细胞和MΦ培养上清中NO的分泌情况。结果显示 ,去除淋巴细胞则脾细胞中的MΦ合成NO水平显著下降 ;外源性IFN γ的加入可明显地提高MΦ合成NO的水平。这表明 ,在约氏疟原虫感染过程中 ,淋巴细胞的存在能促进MΦ合成NO ;IFN γ是促进MΦ合成NO的一种主要细胞因子

摘要: 通过体外扩增 ,克隆恶性疟原虫海南 (FCC1 HN)株GLURP基因 ,测定其基因序列 ,了解该基因的结构及在FCC1 HN株与其它分离株间的序列差异。根据GLURP基因已知序列设计合成 3对引物 ,用PCR技术从FCC1 HN株基因组DNA中扩增 3个部分序列重叠的GLURP基因片段 ;并分别克隆入测序用PMD 18T载体。用双脱氧链末端终止法测定GLURP基因序列 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。恶性疟原虫FCC1 HN株GLURP基因全长 3711bp ,编码 12 36个氨基酸。FCC1 HN株与F32株GLURP基因核苷酸序列同源性为 96 2 7% ;编码氨基酸序列同源性为 95 78%。本文为继续进行FCC1 HN株GLURP抗原的免疫原性和保护性研究奠定基础。

摘要: 目的 :为寻找恶性疟原虫基因工程多表位疫苗保护性评价的模型动物 ,利用小鼠约氏疟原虫 ( Plas-modium yoelii)及小鼠伯氏疟原虫 ( Plasmodium berghei)模型对本实验室构建的恶性疟原虫 ( Plasmodiumfalciparum)多阶段、多表位基因工程候选疫苗进行了体内保护性及免疫模式探索试验。结果在约氏疟原虫模型 ,先用该疫苗基因的大肠杆菌表达蛋白免疫 ,后用含同一基因的重组痘苗病毒加强免疫组 ,与野生型痘苗病毒免疫组及空白对照组相比 ,小鼠的死亡时间延长 ( P<0 .0 1)。结果初步显示 ,约氏疟原虫鼠疟模型可用作该基因工程多表位恶性疟原虫候选疫苗的保护性评价

摘要: 本文对恶性疟原虫环子孢子蛋白 ( circum sporozoite protein,CSP)基因片段进行克隆和序列测定。根据恶性疟原虫 837株基因编码序列设计合成一对引物 ,采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组DNA中特异扩增 CSP基因片段的 区、中央重复区、重复区后可变区和 区 ;经纯化的扩增产物用 Bam H 和 Kpn 双酶切后 ,定向克隆入大肠杆菌——分枝杆菌穿梭表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌 DH 5α,重组克隆经抗性筛选和快速凝胶电泳鉴定 ,再经 PCR和酶切鉴定 ,并对重组子进行序列测定。结果表明从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组 DNA中可特异扩增出约 1171bp的基因片段 ,阳性重组质粒经双酶切和 PCR鉴定与预期的结果一致 ,序列测定表明所克隆的基因和编码环子孢子抗原的基因片段相符。