摘要: 本研究利用重组酶介导恒温扩增RAA技术,建立了一种快速检测疟原虫的方法。选取疟原虫18S r DNA序列,设计了检测疟原虫的通用引物,并对引物进行筛选和特异性检测。筛选出4组扩增效果较好的引物。该方法整个反应过程在37℃下进行,扩增时间短(40 min),并具有良好的特异性。结果表明,成功建立了一种检测疟原虫的RAA法,并且该方法适合于进出口岸疟原虫的快速检测。

摘要: 为获得大量有活力的伯氏疟原虫裂殖体,本研究对伯氏疟原虫ANKA虫株的体外培养条件主要从培养基的用量、培养基胎牛血清的含量、培养的细胞浓度、培养时间及培养的气体环境等方面进行了优化。当小鼠体内虫血率达到1%³%,在红内期疟原虫处于环期或早期滋养体阶段时取血分组培养,观察在不同培养条件下裂殖体的状态并检测其活力。与既往的体外培养方法相比,优化后的培养方法,可将裂殖体的成熟率提高到80%,每个裂殖体含12～16个裂殖子,裂殖体尾静脉注射重新入侵红细胞4 h后的虫血率为1.57%,与对照组相比裂殖体的活力提高3.4倍。优化的方法可以提高裂殖体的得量和活力,为伯氏疟原虫的转染奠定基础。

摘要: 为了获得恶性疟原虫红细胞内期不同生长阶段更加精准的组织材料,本研究探索一种简便易行并能获得同步化程度很高的恶性疟原虫虫株的方法。该方法采用山梨醇多次连续同步化恶性疟原虫环状体,并继续培养得到同步化程度高、窗口小、虫血率高的红细胞内期各期的恶性疟原虫虫株;室温条件下（17～20℃）继续培养同步化至裂成熟殖体期的恶性疟原虫虫株,用孔径1.2μm的无菌滤膜过滤,收集裂殖子。经同步化处理之后,恶性疟原虫在环期、早期滋养体期、晚期滋养体期和成熟裂殖体期的同步化程度分别在90%、85%、85%和80%以上,同步化后各期恶性疟原虫虫血率可达10%²0%,各期虫株的生长周期的窗口可达4 h以内。

摘要: 实验采用鼠疟模型及Peters4天抑制试验法,对从青蒿中分离得到的主要化学成份及其与青蒿素伍用进行了药效学评价。结果显示,青蒿素(QHS)的ED50和ED90分别为(10.2±1.3)mg/kg/d和(29.0±2.7)mg/kg/d。将青蒿素、青蒿酸、青蒿乙素、东莨菪内酯按1∶1∶1∶1混合得到QHH,其ED50和ED90分别为(12.6±1.1)mg/kg/d和(47.0±5.7)mg/kg/d。青蒿酸(QHA)、青蒿乙素(QHB)、东莨菪内酯(QHC)、青蒿黄酮1(QHD)、青蒿黄酮2(QHE)5种成份对鼠疟均有不同程度的抑制作用,但剂量高达500mg/kg/d时,抑制率最高也仅达到59%,远低于QHS的疗效。将分离的5种成份分别与QHS的半数有效剂量配伍进行药效测定,仅QHC的高剂量组显示一定的协同作用,其他各个组均未显示增效。QHH中QHS仅占1/4,但对鼠疟药效测定的结果ED50和ED90的值与QHS相近,提示QHA、QHB、QHC混合成份对QHS有一定的协同作用。因此,传统中药青蒿对疟疾的疗效是由以青蒿素为主的多组份共同作用的结果。

摘要: 采用4天抑制试验法,观察青蒿提取物和青蒿素对伯氏疟原虫超微结构的影响。结果显示,青蒿提取物和青蒿素均使原虫滋养体膜结构损伤,表现为虫体表膜、食物泡膜、限制膜、线粒体膜、内质网、核膜呈现肿胀及膜间隙增宽。有些虫体表膜、食物泡膜呈现多层螺纹膜样改变。严重病变的原虫滋养体退变崩解,结构消失,残留退变的食物泡和吞噬泡散在红细胞内。此外,还观察到青蒿提取物和青蒿素对疟原虫纳虫泡内裂殖子发育有抑制作用。试验证明,青蒿提取物和青蒿素对伯氏疟原虫滋养体的超微结构损伤部位和病变特征基本相同;并提示对疟原虫纳虫泡内裂殖子发育有一定影响。