摘要: 为明确缅甸流行区间日疟原虫红内期疫苗候选抗原Duffy结合蛋白（DBP）的基因多态性特点,提取20例缅甸流行区（Bilin和Paletwa）间日疟原虫基因组DNA,通过PCR扩增和测序检测,参考Mandalay流行区（缅甸）相应序列,对pvdbp-Ⅱ基因进行多态性分析。结果表明,各流行区pvdbp-Ⅱ基因的π值分别为0.002、0.009和0.002,且d_N/d_S均大于1。中性检验表明各流行区pvdbp-Ⅱ基因处于阳性选择;pvdbp-Ⅱ基因在Bilin和Mandalay流行区存在基因重组,各流行区群体间存在不同程度的遗传分化,H14是21种不同的单倍型中出现频率最高的单倍型。Pvdbp-Ⅱ基因存在多态并经历阳性选择,提示其作为红内期疫苗候选靶点;H14高频率的出现,提示以其为基础研制pvdbp-Ⅱ基因作为红内期疫苗候选抗原的可能性。

摘要: 本文旨在探讨恶性疟原虫野生株体外培养的驯化方法。在中缅边境流行区采集12株野生型恶性疟原虫样本,采用添加ALBUMAX II、次黄嘌呤的改进配方,通过逐渐脱离灭活去纤维蛋白原人血浆的培养方式进行人工驯化临床恶性疟原虫株。分别对灭活去纤维蛋白原人血浆对野生型虫株驯化过程及驯化后生长的影响做统计学分析。结果表明灭活去纤维蛋白原人血浆对野生株体外驯化过程生长的影响具有统计学意义,对人工驯化后生长影响不具有统计学意义。最终N13-1231和F08B38两虫株经驯化后可脱离灭活去纤维蛋白原人血浆连续培养。本文成功对中缅边境流行区恶性疟原虫野生株N13-1231和F0838进行驯化,可脱离灭活去纤维蛋白原人血浆连续培养,具有科学研究价值。

摘要: 恶性疟原虫PfMAg-1蛋白为裂殖子表面相关蛋白,为了探究PfMAg-1的功能,本研究采用规律成簇间隔短回文重复及相关失活蛋白（Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPRassociated protein 9,CRISPR/d Cas9）技术,构建恶性疟原虫PfMAg-1低表达质粒,电穿孔方法转染后通过抗稻瘟菌素（Blasticidin S Deaminase,BSD）筛选出恶性疟原虫MAg1^KD（Knock Down,KD）虫株。通过聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）、实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）检测PfMAg-1表达水平。在体外培养条件下观察MAg1^KD虫株生长趋势及裂殖子入侵效率来评价PfMAg-1的表达对恶性疟原虫红内期增殖的影响。结果表明,恶性疟原虫MAg1^KD虫株较对照虫株的体外生长率显著降低,进一步实验提示影响疟原虫增殖速度的原因是MAg1^KD虫株裂殖子入侵效率下降。本研究证实PfMAg-1在恶性疟原虫裂殖子入侵红细胞时发挥重要作用,为进一步评价PfMAg-1蛋白作为疟疾疫苗候选抗原的前景提供了实验依据。

摘要: 为了评价纳米乳作为佐剂对恶性疟疾人工重组蛋白疫苗M.RCAg-1免疫原性的影响,将纳米乳佐剂与M.RCAg-1相配伍,于第0、14、28 d肌肉注射免疫小鼠,抗原量为20μg/只。第3次免疫后10 d,眼球取血并取脾细胞。采用ELISA法检测小鼠血清特异性Ig G抗体水平、抗体亚类及其对抗原单表位的识别,用间接免疫荧光反应(IFA)检测抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别,用ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞免疫应答水平。结果显示疫苗佐剂组小鼠血清中抗M.RCAg-1的抗体水平可达1∶108;疫苗佐剂组产生的特异性Ig G抗体以Ig G1为主;疫苗佐剂组抗体对抗原单表位和天然虫体的识别效果显著。各表位和蛋白诱发免疫小鼠分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞克隆数高于分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数。结果提示纳米乳作为恶性疟疾疫苗M.RCAg-1的佐剂,能够显著提高机体的体液免疫和细胞免疫应答水平。

摘要: 为了探讨人源miR-185对恶性疟原虫var(pfl1955w)基因表达调控并观察感染红细胞粘附所受到的影响,体外培养293T细胞和恶性疟原虫3D7,构建双荧光素酶报告质粒和表达质粒,再分别利用Lipofectamine 2000转染293T细胞和Cytomix电转恶性疟原虫3D7,流式细胞仪检测转染效率,用双荧光素酶报告验证人源miR-185对var(pfl1955w)的dbl区域直接调控作用,Q-PCR检测var(pfl1955w)mRNA的表达,细胞粘附实验检测感染红细胞的粘附。结果显示,293T细胞和3D7的转染效率在50%以上,过表达人源miR-185可显著抑制含var(pfl1955w)dbl的荧光素酶基因的表达;在293T细胞和3D7中,人源miR-185能够减少var(pfl1955w)mRNA的含量,并使感染红细胞粘附作用下降了39%。结果表明,人源miR-185对疟原虫var(pfl1955w)基因表达有下调作用,进而影响恶性疟原虫的粘附。