摘要: 昆虫肠粘蛋白(invertebrate intestinal mucin,IIM)是围食膜(peritrophic membrane,PM)的重要蛋白组分之一,在保护昆虫免受微生物侵染方面起着非常重要的作用。本研究以甜菜夜蛾Spodoptera exigua5龄幼虫中肠总RNA为模板,根据已知的甜菜夜蛾肠粘蛋白SeIIM-8基因的cDNA序列(GenBank登录号:ABW06596)设计引物,利用RTPCR技术扩增得到甜菜夜蛾肠粘蛋白基因SeM-8,序列分析发现其开放阅读框(open reading frame,ORF)长2703bp,编码900个氨基酸残基,预测分子量为95.7kDa。序列分析表明,其氨基酸序列(GenBank登录号:GU255994)与棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)、粘虫Mamestra configurata和小菜蛾Plutella xylostella肠粘蛋白的一致性分别为48%,49%和45%。Western blot分析结果表明,SeM-8粘蛋白在甜菜夜蛾即将孵化的卵和5龄幼虫的围食膜、中肠和粪便中都有存在,在5龄幼虫马氏管、脂肪体、唾腺、血淋巴等组织部位没有发现。本研究为进一步研究IIM结构和功能,寻找生物防治新靶标奠定了理论基础。

摘要: 为了筛选对农产品和环境安全、对害虫高效的植物源杀虫剂,分别采用喷雾法和饲毒法,测定了18种中草药的3种溶剂(水、乙醇、石油醚)提取物对褐飞虱Nilaparvata lugens Sta°l的触杀活性和对甜菜夜蛾Spodoptera exigua Hbner的胃毒作用。结果表明,各种提取物(0.8g/mL)对甜菜夜蛾的胃毒作用不明显,校正死亡率最高为33.33%;但对褐飞虱的杀虫活性较高,其中百部、黄柏、榧子、生山栀、鹤虱、木香的乙醇或石油醚提取物,对褐飞虱3龄若虫的24h校正死亡率均在80%以上,其石油乙醚提取物的LC50值依次为:0.0826,0.0455,0.0145,0.0047,0.0038,0.0033g/mL。采用系统溶剂法分析发现,木香和鹤虱的主要杀虫活性成分均在氯仿萃取物中,表明其杀虫成分易溶于较弱极性溶剂中。进一步通过活性追踪法,对鹤虱提取物的柱层析各流分的活性检测表明,其杀虫活性成分的Rf值为0.55560.5926。该研究为进一步纯化新型植物源杀虫物质并确定其分子结构,从而开发其应用前景及发现新的杀虫活性先导化合物奠定了基础。

摘要: 为阐明热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)幼虫抵抗高温过程中的作用,克隆了其HSP90基因cDNA全长序列,并检测了在系列高温胁迫下不同龄期幼虫体内其相对表达量。根据已报道的热激蛋白90基因序列同源性设计简并引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了甜菜夜蛾HSP90基因全长cDNA(GenBank登录号FJ862050)。该cDNA序列开放阅读框长2154bp,编码717个氨基酸,预测的相对分子量和等电点分别为82.6kD和5.0。该序列具有HSP90家族的典型特征和特殊的功能结构域,并且与多种生物的HSP90基因序列有较高的同源性。为了研究HSP90抵抗高温的作用,构建荧光定量RT-PCR体系,检测了37,39,41,43和45℃胁迫下甜菜夜蛾不同龄期幼虫体内HSP90表达量的变化。结果表明,高温胁迫对甜菜夜蛾幼虫体内的HSP90表达具有明显的诱导作用。幼虫体内HSP90表达量随着温度升高呈增加的趋势。43℃和45℃胁迫下,各龄幼虫体内HSP90的表达量均显著高于常温(P<0.05),但不同龄期之间没有显著差异。这说明HSP90在甜菜夜蛾幼虫抗高温中起到重要作用。

摘要: 为了探讨甜菜夜蛾Spodoptera exigua对不同寄主植物的产卵选择及成虫产卵选择与幼虫取食选择间的关联度,本研究选取玉米、豇豆、甘蓝、黄瓜、棉花、辣椒和番茄7种植物进行了选择性和非选择性实验研究,并采用Y型嗅觉仪测定了成虫对其中3种寄主植物及其挥发物抽提物的趋性。结果表明:在田间非选择性实验中,甜菜夜蛾在不同寄主植物上的落卵量依次为:玉米>辣椒>棉花>黄瓜、豇豆、番茄>甘蓝。Y型嗅觉仪的行为测定表明,雌成虫对玉米及其挥发物抽提物的趋性最强,黄瓜次之,对甘蓝的趋性最弱,这与雌虫的产卵选择性一致。不同龄期甜菜夜蛾幼虫对寄主植物的取食选择性有所不同,且随观测时间的延长有所改变;低龄幼虫对豇豆、玉米和黄瓜的选择性较强,对甘蓝、番茄、辣椒和棉花的取食选择性则较弱,高龄幼虫对辣椒也具有较强的选择性;5龄幼虫对寄主植物的选择性不如低龄幼虫明显。结果显示,甜菜夜蛾对不同寄主植物的产卵选择性显著不同,植物抽提物在雌成虫的产卵选择中具有重要作用,甜菜夜蛾对寄主植物的产卵选择性和幼虫取食选择性并不一致。

摘要: 触角结合蛋白(antennal binding proteins,ABPs)是气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)的一个亚类,推测其在昆虫嗅觉中起作用。为了探讨这一问题,本研究通过转录组数据分析并利用RACE技术,克隆了甜菜夜蛾Spodoptera exigua触角结合蛋白Ⅱ基因(SexigABP2)的全长cDNA序列(GenBank登录号为HQ234486)。序列分析表明,该基因开放阅读框长444bp,编码148个氨基酸,具有OBPs典型的6个半胱氨酸位点;其氨基酸序列和烟芽夜蛾Heliothisvirescens的HvirABP2的一致性最高,达72%。实时定量PCR分析显示,该基因主要在触角中表达,在喙、足、翅等组织中也有少量表达,且在雌蛾触角及足中的表达量显著高于雄蛾。进一步对该基因进行原核表达和纯化,利用荧光竞争结合实验测定了SexigABP2对35种气味物质的结合能力,发现其对甜菜夜蛾性信息素组分(Z)-9-十四碳烯醇和植物挥发物法尼醇的结合能力较强,结合常数分别为8.24μmol/L和8.14μmol/L。结合能力比较表明,SexigABP2对不饱和长碳链化合物较饱和短碳链化合物具有更强的结合能力;在不饱和长碳链化合物中,对醇类物质又较乙酸酯类物质具有更强的结合能力。结果提示SexigABP2可能参与了成虫对不饱和长碳链的植物挥发物的感受。