摘要: 用RTPCR的方法,从感染柔嫩艾美尔球虫(Eimeriatenella)第5天的鸡盲肠分离的第二代裂殖子中克隆出MZ57基因,并进行抗原表位分析和原核表达,结果表明,MZ57基因ORF为945bp,与GenBank里已知序列(登录号为L08257)比较核甘酸和氨基酸同源性均为99.9%。应用DNAStar软件对该基因的抗原表位进行了分析,发现其B细胞表位广泛分布在80～300区域,其中80～130区域、190～220区域和300～320区域更为突出,而T细胞基序则集中在123～190区域和220～300区域。根据MZ57基因序列重新设计一对引物,PCR方法扩增出不含信号肽长度为885bp的基因序列,克隆到pET28b获得重组质粒pET28bMZ亚,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白约36.5kDa10poundnote,符合目的蛋白大小;同时应用Westernblot方法与抗第二代裂殖子和子孢子的2种高免血清反应,结果表明抗裂殖子和子孢子血清均能识别MZP(裂殖子蛋白,MZP,merozoiteprotein)。

摘要: 利用Trizol一步法从柔嫩艾美耳球虫孢子化10h卵囊提取总RNA。利用poly(A)QuikmRNAIsolationkit分离纯化了mRNA。采用cDNASynthesisKit合成cDNA,以XR-λZAP为载体,构建了cDNA表达文库,经蓝白斑筛选,其重组率为98%,滴度为0·9×106pfu/mL,扩增后滴度为1×109pfu/mL。随机取10个克隆,提取λDNA后,经PCR鉴定,插入片段长度大于0·4Kb。该cDNA表达文库的构建为下一步功能基因的筛选等奠定了良好基础。

摘要: 圆孢球虫病(Cyclosporiasis)是一种新发现的、经食物或水传播的人体寄生虫病,主要症状为胃肠炎和迁延性腹泻。本文对此种原虫的病原学、流行病学、临床表现、实验室诊断及治疗方面的研究进展进行了综述。

摘要: 用PCR方法扩增堆型艾美耳球虫广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的阅读框架 (ORF) ,与质粒表达载体pYA3342连接后转化大肠杆菌E-coliX6 2 12 ,获得阳性重组质粒后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)X4 5 5 0。经IPTG诱导获得了cSZ1基因在减毒S typhimurium的高效表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 9 2 % ,重组蛋白分子量约为 19kDa。将重组减毒S typhimurium分别以 10 8或 10 9CFU 鸡经口免疫 4日龄岭南黄肉鸡 ,免疫后两周血清中可检测到抗cSZ1的特异性IgG ,3周时抗体水平达到峰值 ;2 5日龄时可在肠道检测到特异性IgA的分泌。免疫后 3周 ,试验鸡分别经口攻击感染 5 0 0个E acervulina孢子化卵囊 ,结果显示免疫组与非免疫组有相似的排卵囊曲线 ;计数攻虫感染后第 3 5～ 9 5天卵囊总产量 ,2个免疫组分别能降低 2 5 . 1%和 4 6 . 4 %的卵囊产生。

摘要: 以柔嫩艾美尔球虫 (Eimeriatenella) 5 0× 1 0 4 个孢子化卵囊 只的剂量感染雏鸡 ,对感染后雏鸡体内NOS活性水平的动态变化进行了检测。结果显示 :E .tenella感染雏鸡与对照组的相比 ,其血清总NOS和iNOS活性变化差异不显著 (P >0 0 5 ) ,感染雏鸡脾脏和法氏囊组织总NOS活性自感染后第 2天逐渐升高 ,在感染后第 5～ 7天感染组雏鸡脾脏组织NOS活性显著或极显著地高于对照组 (P≤ 0 0 5、P≤ 0 0 1 ) ,感染后第 6天、第 7天感染雏鸡法氏囊组织中NOS活性显著地高于对照组 (P≤ 0 0 5 ) ;感染组雏鸡自感染后第4天盲肠出现病变 ,第 7天病变值最高 ;盲肠组织中总NOS活性在感染后第 6和第 7天显著地高于对照组(P≤ 0 0 5 ) ;整个试验期间 ,感染组雏鸡的脾脏、法氏囊和盲肠组织中iNOS活性与对照组并无显著性变化差异 (P >0 0 5 )。结果提示 ,E .tenella感染雏鸡会导致脾脏和法氏囊组织的NOS活性变化 ,其原因可能是由于入侵球虫所产生的某些因子激活cNOS ,使NOS的活性升高 ,而似乎并没有诱导宿主体内iNOS的表达。本文就柔嫩艾美尔球虫感染的NO致病的相关机制进行了讨论。