摘要: 在本团队前期研究中，通过宏病毒组学测序与生物信息学分析，从一例死亡华南虎（Panthera tigris amoyensis）组织病料中鉴定出一株新型虎源猫杯状病毒（Feline calicivirus isolated from tiger,TCaV），命名为LYH1224株。为实现对该病毒的快速检测，基于TCaV LYH1224株基因组序列设计特异性引物，经反应体系与条件优化，构建了TCaV绝对荧光定量PCR检测方法，并开展了敏感性、特异性和重复性评估。同时，利用该方法对本实验室保存的大型猫科（Felidae）动物临床样品进行检测。结果显示：所建立的方法可特异性扩增新型TCaV基因序列；经优化，引物对4160S/4270A在最佳反应体系与程序下，C_t值与标准品拷贝数浓度的对数呈现良好的线性关系，扩增效率（E）达101.8%，相关系数（R2）为0.996，最低检测限为2×10～1拷贝/反应，且组内与组间重复试验变异系数（C_V）均小于2.50%；在大型猫科动物临床样品检测中，阳性样品检出率为7.59%（6/79），个体阳性率为2.82%（2/71），且2只阳性个体来自同一保育机构，证实新型TCaV已在华南虎种群中小范围传播。本研究建立的检测方法特异性强、灵敏度高，重复性和实用性佳，为我国大型猫科动物新型TCaV的快速检测和日常监测提供了有效工具。

摘要: 个体识别技术是大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）保护管理和科学研究的基础。自20世纪80年代开展大熊猫生态学研究和迁地保护以来，研究人员基于痕迹、影像和音频研发了距离-咬节法、分子生物学法、面部识别法、足迹影像法、热成像技术和被动声学监测法等个体识别方法。为此，本文整合评述了上述各类个体识别方法的原理、工作流程、优缺点，以及未来的发展方向与适用场景，以期为大熊猫的科学保护和国家公园的管理提供参考。

摘要: 为了探究秦岭大熊猫（Ailuropoda melanoleuca qinlingensis）圈养种群的遗传多样性和亲子关系，指导其科学繁育，本研究建立了一套优化的技术体系。利用筛选出的9个高分辨率微卫星位点（以四碱基重复为主）进行PCR扩增与毛细管电泳分型，并对32只个体进行遗传多样性分析。结果显示：通过均质化与热孵育预处理，显著提升了粪便样本中宿主基因组DNA的得率与质量。秦岭大熊猫群体H_o为0.281～0.938，平均为0.596,H_e为0.391～0.793，平均为0.560, H_o> H_e，说明基因杂合度水平高；多态信息含量（PIC）为0.351～0.747，平均为0.499，其中3个位点为高度多态性，其余为中度多态性，群体遗传多样性高。亲子关系鉴定结果显示，利用9对微卫星引物组合在双亲未知时单亲累积排除概率（CE-1P）达0.999 999，双亲之一已知时单亲累积排除概率（CE-2P）达0.999 978，双亲未知时亲本对累积排除概率（CE-PP）达0.999 088。基于上述方法及Pop Gen32与i TOL的遗传距离聚类分析，成功明确了5只子代的父本来源。研究结果为完善大熊猫遗传谱系、防止近交衰退及制定科学配种方案提供了可靠的技术支持和关键数据。

摘要: 为了解大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）肠道脱落细胞中线粒体DNA（mtDNA）的异质性特点及其与年龄的关系，以92只不同年龄的大熊猫粪便为材料，通过扩增子高通量测序研究非编码的D-loop区、编码rRNA的16S rRNA区以及编码蛋白质的ND1和ND2区的异质性。结果显示：D-loop区存在3个异质性热点区段，突变碱基的数量远远高于其他3个编码区；D-loop区T_S/T_V小于16S rRNA和ND两个编码区，表明后两者较D-loop区受到更强烈的纯化选择；ND区第3位密码子的突变频率显著高于前两位，选择压力最低。此外，16SA3、ND1A6和ND2A7三个编码区的异质性可能与年龄相关。上述结果表明，大熊猫粪便DNA的异质性突变构成了一个多样性较高的线粒体基因库，突变在组织细胞水平上受到自然选择的作用。该线粒体基因库为揭示动物适应性进化机制、个体对环境的适应方式、个体适合度和动物与肠道微生物及环境的关系等提供一个全新的角度，也可能成为有潜力的大熊猫个体年龄预测标记。

摘要: 为探究新老饲养员轮换对圈养大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）行为规律的影响，以贵阳黔灵山公园动物园大熊猫馆的2只圈养大熊猫（海浜和星宝）为研究对象，在2023年2—10月，采取焦点动物取样法和连续时间记录法在固定时间段对圈养大熊猫的运动、采食、刻板和休息行为进行记录和分析，用以对比分析3种饲养员轮换类型（A组为3名老饲养员；B组为3名普通新饲养员；C组为3名专业新饲养员）对圈养大熊猫行为表现的影响。结果表明：B组饲养员会导致大熊猫刻板和运动行为显著增加（P <0.05），其中，海浜比星宝的刻板行为持续时间更长，B组饲养员会导致大熊猫采食和休息行为显著减少（P <0.05）；大熊猫刻板行为的持续时间会随着与饲养员相处时长的增加而逐渐较少，A组饲养员基本不会影响大熊猫的刻板行为，C组较B组饲养员能更快地使大熊猫的刻板行为时间缩短，表明大熊猫的行为明显受饲养员轮换的影响，而专业饲养员比普通饲养员更能快速改善大熊猫的刻板行为。因此，非必要不应频繁更换动物饲养员，同时应尽可能提高饲养员业务水平，确保提升动物福利。