摘要: 采用PCR方法扩增猪肥胖基因编码的成熟蛋白cDNA序列 ,并在 5′端加上BamHⅠ位点 ,3′端加上EcoRⅠ位点 ,将 5′端密码子CCC转变为大肠杆菌常见密码子CCG ,扩增得到 4 5 9bp的片段 ,克隆于融合表达载体pGEX 2TBamHⅠ和EcoRⅠ位点 ,酶切、测序正确 ,经 0 1mmol/LIPTG诱导表达出一条约 4 2kD的融合蛋白 ,其中 2 6kD为 pGEX 2T中带有的谷胱苷肽转移酶 ,16kD是猪肥胖基因表达产物瘦蛋白。利用非融合表达产品制备抗血清 ,检测融合表达的重组蛋白 ,Western blot为阳性。

摘要: 分析中国三种实验用小型猪线粒体DNA (mtDNA)D loop的多态性 ,建立各品种品系猪的遗传标记 ,为各品种品系猪的鉴别提供依据。应用PCR对西双版纳近交系小耳猪、广西巴马小型猪、贵州小型香猪和长白猪血液总DNA样品中mtDNAD loop进行扩增 ,用 2 3种限制性内切酶消化 ,观察其酶切多态。PCR扩增其mtDNAD loop 5′端 2 2 7bp高变区域 ,应用PCR SSCP和PCR直接测序分析 ,观察其单链构象多态和序列多态。结果显示 :3种小型猪之间未见酶切长度多态、单链构象多态和序列多态 ;与长白猪之间表现出单链构象多态和序列多态。本研究认为 :3种实验用小型猪之间mtDNA多态性贫乏 ,证明其在母系起源和进化上的一致性 ,亲源关系很近 ,应用PCR RFLP、PCR SSCP和PCR直接测序分析 ,尚不能作为 3种实验用小型猪品种品系鉴定的依据 ,但与长白猪等欧系猪比较有一定差异。

摘要:

摘要: 表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶提取物EGCG的生物活性成分,为了探讨其对猪前体脂肪细胞增殖和分化的影响,以不同浓度EGCG处理猪前体脂肪细胞,MTT法测定EGCG对猪前体脂肪细胞生长的影响;油红O染色检测猪前体脂肪细胞的形态学变化;油红O染色提取法定量分析脂肪细胞充脂量的变化;半定量RT-PCR检测分化转录因子过氧化物酶体增生物激活受体γ2(PPARγ2)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达水平变化。结果显示:EGCG随着浓度的递增显著抑制猪前体脂肪细胞的增殖(P<0·01);低浓度的EGCG(5μmol/L)不影响脂肪细胞分化,而高浓度EGCG(200μmol/L)显著抑制猪前体脂肪细胞分化,同时下调PPARγ2和C/EBPαmRNA表达,本研究结果表明EGCG可抑制猪前体脂肪细胞的增殖和分化。

摘要: 脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stemcell,AMSCs)是一类来源于脂肪组织并具有多向分化潜能的干细胞。近年来的研究证明,脂肪组织具有取材方便和干细胞含量高的优势,有望在研究与应用领域成为骨髓干细胞的替代物。猪是一种比啮齿类更接近人类的模式动物,具有较强的脂肪沉积能力。本研究探讨了猪脂肪间充质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向脂肪细胞诱导分化的条件。采用Ⅰ型胶原酶消化分离脂肪微管基质成分,传代培养扩增,流式细胞仪检测细胞表面标记。取第3-7代AMSCs,采用不同方法诱导AMSCs向脂肪细胞分化,光学显微镜下可观察到诱导后的细胞内有高折光性的小脂滴出现,油红O染色成阳性,不同诱导方法诱导率不同。被诱导细胞用RT-PCR可检测到脂肪细胞分化标志基因LPL和PPARγ的表达。结果表明可以从脂肪组织中分离培养出AMSCs,经传代后可提高其纯度。CD44、CD105表达呈阳性,CD14、CD34、S-100、HLA-DR呈阴性,在合适的诱导条件下,可向脂肪细胞分化。