摘要: 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。

摘要: Toll样受体(TLRs)和抗菌肽是机体天然免疫系统的重要组成部分,是抵御外界有害微生物或病毒入侵的重要屏障。乌金猪、青峪猪、成华猪是中国优良地方猪种,具有繁殖力高、抗病耐逆性强等优点。本实验比较了8月龄乌金猪、青峪猪、成华猪与约克夏猪的消化道、呼吸道局部免疫组织和全身免疫器官的先天免疫特点,采用实时荧光定量PCR技术检测TLRs(TLR1、TLR2、TLR4、TLR7、TLR9)和抗菌肽(p BD-1、PR-39)基因在4种猪的胸腺、脾脏、扁桃体、肠系膜淋巴结和肺门淋巴结中的表达差异。结果显示,成华猪胸腺中TLR7、PR-39,脾脏中TLR4、TLR7,肠系膜淋巴结中TLR4、TLR9,肺门淋巴结中TLR1、TLR4、TLR7、TLR9 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P <0. 05);乌金猪胸腺中TLR1、TLR9,扁桃体中TLR1、TLR2、TLR4、TLR7、TLR9、p BD-1,肠系膜淋巴结中TLR7 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P <0. 05);青峪猪扁桃体和肠系膜淋巴结中PR-39 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P <0. 05)。这些结果为进一步利用优良地方猪种杂交育种和筛选抗病分子标记提供了新的线索。

摘要: 为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P <0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P <0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P <0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P <0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P <0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。

摘要: 猪Sus scrofa domesticus的白细胞抗原复合体(SLA)基因的单核苷酸多态性(SNP)与猪生长发育等性状有关。为了开发藏猪品系选育的遗传标记,本文测定了阿坝藏猪蒲江种群89头个体的SLA-DRB基因部分序列,共鉴定出14个SNP位点。根据位点间的连锁强度分为3个组合(组合1:g. 11470、g. 11945、g. 11997、g. 11387、g. 11369与g. 11829;组合2:g. 11532与g. 11838;组合3:g. 11911与g. 11708)和4个独立多态位点(g. 11468、g. 11440、g. 11478和g. 11944)。将基因型与体质量、体长等14项生长发育性状进行关联性分析,结果表明,组合3的基因型与体高、体长、胸围等11项体尺指标间的相关性均显著(FDR <0. 05),基因型为TT/CG的个体较小,表明SLA-DRB基因可用于藏猪小型化选育的遗传标记。管围和12项管围率(除体质量以外)与SLA-DRB基因多态性的相关性最高,受组合1、组合2和位点g. 11468、g. 11478基因型的极显著影响(FDR <0. 001),其中,基因型为组合1=GGGAAC/GGGAAC、组合2=GT/GT、位点g. 11468=C/C和g. 11478=C/C的个体拥有更大的管围和管围率。管骨骨髓是SLA基因发挥免疫功能的主要场所之一。本研究为基于管围的猪种筛选提供了理论依据和可用的SNP位点,也为藏猪抗病遗传筛选提供了基础数据和参考资料。

摘要: 目的探讨猪Sus scrofa domesticus白细胞介素2（IL-2）和融合白细胞介素4/6（IL-4/6）基因的共表达对仔猪免疫应答的影响,为进一步研制新型免疫调节剂来加强仔猪抵御断奶后多系统衰竭综合征奠定基础。方法将猪IL-2和IL-4/6融合基因的共表达重组质粒,用壳聚糖材料包裹制成纳米颗粒,记作VRIL-4/6-2-CS。将仔猪分为2组,分别肌肉注射VRIL-4/6-2-CS（实验组）和生理盐水（对照组）,2组均同时接种猪圆环病毒2型（PCV-2）疫苗,在接种后的第0、7、14、28天采集血样并分析免疫变化。结果实验组仔猪血清中的IgG2a抗体数量和血液中CD4⁺、CD8+^T淋巴细胞数量均显著高于对照组（P<0.05）;同时,实验组仔猪的IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、TLRs（TLR-2,7）、STATs（STAT-1,2,3）基因表达水平也显著高于对照组（P<0.05）。尽管2组之间PCV-2特异性抗体的含量差异无统计学意义,但是实验组仔猪的生长速率显著高于对照组（P<0.05）。结论 VRIL-4/6-2-CS能促进仔猪对PCV-2疫苗的免疫应答,是一种安全有效的免疫佐剂。