摘要: 目的 研究比格犬雌激素受体β(Estrogen receptor β, ERβ)及其剪接异构体在生殖调控中的功能,构建比格犬ERβ的p MAL-p5x/ERβ 480 DE3 E.coli重组菌株,并进行纯化和鉴定。方法 Trizol法提取发情期比格犬下丘脑总RNA,RT-PCR获得cDNA，以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物，扩增ERβ保守区基因编码序列(16-496 bp)，连接原核表达载体p MALp5x，筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α，再转化大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTG诱导表达，表达产物经经麦芽糖亲和树脂(Amylom Resin)亲和层析分离纯化，并对纯化的融合蛋白进行鉴定。结果 构建了p MAL-p5x/ER?480重组质粒，在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白, SDS-PAGE显示分子量约为60 000,与预期结果一致;优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件:分别在0.2%葡萄糖, 100μg/ml Ampcillin, 0.1mmol/L IPTG 37℃培养5 h或在0.2%葡萄糖，50μg/ml Ampcillin, 0.2mmol/L IPTG 37℃培养3 h，融合蛋白表达效果比较好。结论 构建了p MAL-p5x/ERβ480原核表达重组质粒，获得了比格犬MBP-ERβ融合蛋白，为犬种属特异性ERβ多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础。

摘要: 目的 探讨经快速双上肺静脉起搏方法制作犬心房颤动动物模型的可行性。方法 10只健康比格犬经开胸途径植入十极导管电极，快速(1 200次/min)起搏双上肺静脉6 h。观察房颤诱发情况，对起搏前后双上肺静脉及左心耳电生理检查结果进行比较。结果 8只犬完成实验，房颤诱导成功率80%。高频率刺激诱发的房颤模型能使双上肺静脉区及左心耳部位ERP先降低后升高(145±15.1 vs 130±16.3 vs 136±11.4, P=0.004、P=0.494)，存在统计学显著差异。诱发房颤5 h后，总的房颤诱发窗口(∑WOV)较基线略有升高，但无明显统计学差异(26.7±65.3 vs 20±52.9,P>0.05)。而在乙酰胆碱诱发房颤(第0 h、1 h、3 h、6 h)时，可见房颤的诱发时间呈现先上升后下降的过程，而这种趋势与ERP的变化趋势存在相关性。结论 经快速双上肺起搏方法制作心房颤动动物模型，可用于房颤发病机理、电生理重构、心肌重构、分子生物学改变等临床研究，也可用于心动过速性心肌病及部分心力衰竭的研究。

摘要: 目的 探索活体手术获取Beagle犬孕龄30 d胎儿及其成纤维细胞培养的方法。方法 对雌性Beagle犬进行发情鉴定并适时配种受孕，然后用B超观察胎儿发育情况确定其妊娠时间。当母犬妊娠30 d时，采用外科手术取出一侧子宫角的胎儿，去除胎儿的头、四肢及内脏，用胰酶消化法分离胎儿成纤维细胞，并在体外进行培养和传代。同时保留母犬另一侧子宫角的胎儿，术后加强护理使剩余胎儿继续发育。结果 本实验成功分离培养出Beagle犬胎儿成纤维细胞；在保留母体的情况下让另一侧子宫角胎儿继续发育并出生成活。结论 本实验保留了母体，使其仍具有繁殖力，可作为胚胎移植的受体；另一侧子宫角胎儿的正常发育并出生成活，可为今后体细胞克隆Beagle犬提供具有全同胞关系的正常对照犬。

摘要: 为提供比格犬全身动脉的立体构筑，应用管道铸型技术，过氯乙烯为填充剂，制作比格犬全身动脉铸型标本。结果表明：比格犬全身动脉铸型外观完整美观,血管的整体性和连贯性好，立体感强，能充分显示比格犬全身动脉的分支分布和走行途径，所做标本对相关生物医学研究具有重要应用价值。

摘要: 目的 研究慢性肾功能衰竭氮质血症期中医脾肾虚型比格犬模型的手术造模方法。方法 采用左肾皮质电灼法与肾动脉狭窄结扎法相结合，1周后切除右肾。术后3 d及每周检测血尿素氮、肌酐。结果 造模前尿素氮为7.21±0.72 mmol/L，肌酐为82.40±9.42μmol/L,造模术后30 d尿素氮为11.22±5.69 mmol/L,肌酐为125.55±68.50μmol/L(P值均<0.05)。临床表现为脾肾虚证候。结论 采用左肾皮质电灼法与肾动脉狭窄结扎法相结合，可以造成理想的慢性肾功能衰竭氮质血症期脾肾虚型比格犬模型。