摘要: 根据Gen Bank中发表的犬瘟热病毒(CDV)的基因组序列设计了H和F基因的2对引物,通过RT-PCR扩增出从发病小熊猫分离的CDV的H和F基因,并将其克隆入到18T-simple载体上进行测序。使用Kpn I和Xho I限制性内切酶对重组载体进行双酶切并将目的基因克隆到pcDNA 3.1表达载体上,构建完成后转染293T细胞,转染48 h后,再利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因的转录和目的蛋白的表达。结果表明,表达载体经转染后,在293T细胞中,目的基因均能得到转录而且正确表达。这为下一步基因疫苗的研究奠定了良好的基础。

摘要: 对分离自国内虎源的犬瘟热病毒进行细胞培养及PCR鉴定,并对H蛋白进行序列及遗传演化分析。结果显示:本分离株经传代培养后可以引起Vero细胞脱落和死亡,且扩增出580 bp的特异性目的片段。H蛋白作为犬瘟热病毒表面膜蛋白,在病毒感染过程中担负着重要的作用,H蛋白识别并吸附于细胞表面受体,决定病毒细胞嗜性,进而决定病毒的宿主特异性。对本研究中H蛋白进行分析发现:全长共1 824个碱基,共计编码608个氨基酸,H蛋白具有9个N-糖基化位点,具有549Y的特点。在Genbank中进行Blast分析表明,分离株的H序列与登录号为AF178038的小熊猫源、登录号为KM386683的东北虎源犬瘟热分离株的核苷酸序列相似性最高,均为99%。下载犬瘟热相关序列进行遗传演化、氨基酸序列比对分析,发现本分离株的H基因与标准强毒株A75/17的氨基酸同源性为96.2%,与疫苗Onderstepoort株的氨基酸同源性为89.8%。遗传演化分析显示本分离株基因型属于Asia-1型,与我国流行的野毒株相似。

摘要: 2020年2月12日福州动物园华北豹(Panthera pardus japonensis)初产1对雌雄幼仔,由于母豹弃仔,遂取出进行人工育幼。在人工育幼过程中,采用美国Pet Ag牌0—6周犬奶粉作为代乳,经过80 d的养育,幼豹成功存活并顺利从育幼间转至笼舍饲养,雌雄幼豹体重分别从570、650 g增至3 890、4 310 g。育幼团队严格按照操作流程进行人工育幼,重点记录了饲喂方法、育幼环境、幼豹行为及雌雄幼豹成长差异,为华北豹的人工育幼及其保护工作提供参考。

摘要: 为构建能够表达大熊猫源犬瘟热病毒(CDV)分离株giant panda/SX/2014 H蛋白的复制缺陷型重组腺病毒,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增株giant panda/SX/2014 H基因,通过TOPO连接克隆至入门载体pE NTR/D-TOPO,得到重组入门质粒pE NTR/D-TOPO-CDV-H,然后与腺病毒骨架载体pA d/CMV/V5-DEST进行LR重组,获得重组质粒pA d-CDV-H;重组质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,获得重组腺病毒rA d-CDV-H,连续传代后对获得的重组腺病毒分别进行病毒滴定、免疫荧光和Western blot鉴定。经免疫荧光方法及Western blot鉴定结果表明,重组腺病毒rA d-CDVH感染293A细胞、Vero细胞后均可以成功表达H蛋白,获得的重组腺病毒的滴度高达1010IFU/mL。成功获得能够表达大熊猫源CDV H蛋白的重组腺病毒rA d-CDV-H,在进一步证明其安全有效后,可为大熊猫犬瘟热免疫预防提供候选疫苗株。

摘要: 为阐明2015年在内蒙古呼和浩特地区3株美洲驼源狂犬病病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,经基因扩增和测序获得3株美洲驼源RABV N基因序列,并进行遗传进化分析。结果显示3株RABV之间N基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为100%,且都与2011年呼和浩特奶牛源和犬源毒株、2013年内蒙古牛源毒株、2007年湖北犬源毒株、2016和2018年北京犬源毒株、2006年天津犬源毒株和2009年福建犬源毒株的亲缘性最高,同源率为100%。这些毒株位于同一个遗传进化群内,均属于CTN-1(Asian谱系)。研究结果说明3株美洲驼源RABV的N基因与参考的内蒙古、湖北、北京、福建和天津毒株起源于共同的祖先。