摘要: 蛋白磷酸酶2A(PP2A)参与细胞中蛋白质的可逆磷酸化作用,在磷酸化信号通路调控方面具有重要功能,其活性受蛋白磷酸甲酯酶-1(PME-1)和其他因素的调控。为阐明牦牛杂交雄性不育的分子机制,本研究从牦牛睾丸中克隆了PP2A催化亚基α基因(PPP2CA)和PME-1基因c DNA序列,编码区长度分别为930 bp和1 143 bp,编码的氨基酸序列保守;定量PCR检测显示,犏牛(n=7)睾丸中PPP2CA与PME-1基因的m RNA水平均极显著低于牦牛(n=13,P<0.01)。根据本研究结果,推测犏牛睾丸中这2个基因的显著下调可能会影响一些重要信号通路,且与犏牛雄性不育有关。

摘要: MAPK信号通路对哺乳动物的精子发生与凋亡有重要的调节作用,被认为是精子发生的重要决定因素之一。本研究通过比较MAPK信号通路中ERK1、ERK2、P38基因在牦牛及其杂交后代犏牛睾丸组织中的相对表达量,探索犏牛雄性不育的分子机制。实验从成年雄性牦牛(n=10)和犏牛(n=7)的睾丸组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测牦牛和犏牛睾丸组织中ERK1、ERK2、P38基因mRNA水平。结果表明:牦牛睾丸中ERK1、ERK2基因的表达量极显著高于犏牛(P<0.01),P38基因在牦牛和犏牛睾丸中均有表达,但差异无统计学意义。提示ERK1、ERK2基因作为MAPK信号通路的重要成员,可能与犏牛睾丸精子发生障碍有一定关联。

摘要: 目的对犏牛囊胚玻璃化冷冻前后的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)和可变剪切(alternative splicing,AS)进行比较分析。方法采用普通娟珊牛精子和牦牛卵母细胞,以体外授精(in vitro fertilization,IVF)的方式获得犏牛囊胚。提取犏牛新鲜囊胚和经玻璃化冷冻复苏后的犏牛冻融囊胚总RNA,构建文库并进行高通量测序。采用SAMtools-0.1.19和ASprofile软件分别进行SNP和AS分析。结果犏牛新鲜囊胚和冻融囊胚样本通过去低质量序列、去接头污染等过程后,分别得到51 099 116和54 192 358条待分析数据(Clean Reads)。新鲜囊胚和冻融囊胚分别检测到116 681和224 750个SNP位点。在新鲜囊胚转换型SNP中,C/T类型数量略多于A/G类型;但在冻融囊胚中,A/G类型数量略多于C/T类型;两样本颠换型SNP中,A/T所占比例最少。新鲜囊胚和冻融囊胚转换和颠换型SNP的比例分别为2.57和2.45。新鲜囊胚和冻融囊胚分别检测出49 388和65 241个AS事件,主要有5种AS类型,其中转录起始区域和转录结束区域AS所占比例最大。结论利用RNA-Seq技术对玻璃化冷冻前后犏牛囊胚SNP和AS进行比较分析,可为后续人类胚胎冷冻前后相关基因功能分析和挖掘提供有效数据和理论基础。