摘要: 为了解大熊猫国家公园广元片区野生动物及其生活环境中大肠杆菌流行病学特点，防止大肠杆菌在该区域造成流行性疫病，探明该区域野生动物对抗生素的耐药情况，本研究2022年8—9月采集大熊猫国家公园广元片区内野生动物粪便、水及土壤样品共计243份，采用16S rRNA、K-B法、高通量荧光定量PCR法和PCR技术对该区域的大肠杆菌进行分离鉴定、药敏实验、耐药基因和毒力基因检测。结果显示：243份样品中共分离鉴定出86株大肠杆菌，分离率为35.39%；该区域内分离到的大肠杆菌对阿莫西林有较高的耐药率(52.33%)，对链霉素、庆大霉素等抗生素的耐药率较低(1.16%～9.30%)，对头孢他啶、氯霉素、氟苯尼考、甲氧苄氨嘧啶均敏感；携带大量的耐药基因，其中多重耐药类(83.14%)、磺胺类(55.52%)、四环素类(48.52%)抗生素耐药基因携带率较高，其余耐药基因携带率为26.16%～35.72%；分离株携带1～6个毒力基因，irp2检出率(91.86%)最高，其次为ompA、ibeB和tsh (检出率分别为55.81%、69.77%和52.33%),FyuA、fimH和PapA检出率较低(分别为17.44%、19.77%和1.16%);86株大肠杆菌中均未检出5种致泻性大肠杆菌。本研究为大熊猫国家公园广元片区野生动物及环境源大肠杆菌的流行情况提供了科学数据参考，为人兽共患病的防控提供生态学依据。

摘要: 通过测定圈养动物粪便中的激素水平，监测其发情与怀孕状态和评估其福利状况是目前普遍采用的一种实验手段。然而，现有研究对于圈养野生动物粪便样本的处理及其激素萃取方法存在很大分歧，研究结果也不尽一致。本研究采集了10只(雌∶雄=1∶1)圈养大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的粪便样本，分别采用冷冻干燥-研筛法和冷冻干燥-粉碎法处理粪便样本，然后分别使用80%甲醇、90%乙醇和95%乙醇3种萃取剂进行激素萃取，最后比较2种粪便处理方法和3种溶剂萃取方法所获得的粪便样本中孕酮、雌二醇、睾酮和皮质醇的浓度。结果表明，冷冻干燥-研筛法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中雌二醇和孕酮检测值最高，冷冻干燥-粉碎法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中睾酮检测值最高。冷冻干燥-粉碎法结合90%乙醇溶液萃取处理的样本与冷冻干燥-研筛法结合80%甲醇溶液萃取处理的样本中皮质醇检测值更高，且2种方法的检测结果差异不显著。综合粪便处理难易程度和萃取溶剂性质，建议雌二醇、孕酮和睾酮激素检测根据最高检测浓度的方法进行粪便前处理，皮质醇激素检测使用冷冻干燥-粉碎法结合90%乙醇溶液萃取方法进行粪便前处理。本研究为动物粪便生理指标测定提供了技术指导，可应用于野生动物生理生态、繁殖生态和和保护生物学相关研究。

摘要: 大熊猫在野外食物选择的广泛性远大于圈养个体。均衡饮食对于大熊猫异地保护至关重要，其中包括适当水平的微量营养素。评估圈养大熊猫不同采食期的营养状况，有助于构建科学的大熊猫饲养策略。本研究选取7只健康成年圈养大熊猫，依次饲喂竹叶(竹叶采食期)和竹笋(竹笋采食期)。竹叶采食期进行3次饲喂实验，竹笋采食期进行2次饲喂实验，每次饲喂实验持续3 d，每次饲喂实验间隔28 d。实验期间记录大熊猫的日采食量，测定竹子的维生素含量并查阅其矿物元素含量，从而比较大熊猫在不同采食期的维生素和矿物元素日摄入量。各采食期结束时采集大熊猫血样，测定血清中13种维生素和10种矿物元素水平。结果发现：与竹叶相比，竹笋的V_A、V_E、V_(K1)、烟酸、吡哆醛及吡哆醇含量显著下降，V_(B5)和V_(B12)含量显著增加(P<0.05)。与竹叶采食期相比，竹笋采食期大熊猫的V_E、V_(K1)、Ca、Fe、Cu和Mn日摄入量显著降低，V_(B5)、V_(B6)、V_(B7)、V_(B12)、Mg和Zn日摄入量显著上升(P<0.05)；竹笋采食期大熊猫血清的V_(B2)、Cr和Se水平显著下降，V_E、V_(K1)、V_(B5)、V_(B7)、V_(B9)和V_(B12)水平显著增加(P<0.05)。采食竹子不同部位可影响圈养大熊猫的维生素与微量元素摄入和血清水平。不同采食期微量营养状况的差异和规律可为圈养大熊猫日常饲养管理中竹子供给、营养补充提供理论依据。

摘要: 在大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的迁地保护和种群饲养管理中，及时、快速地进行个体识别和行为监测，对其健康管理具有至关重要的作用。圈养大熊猫健康状况通常由专门的饲养人员肉眼观测，人力成本高、效率低并且缺乏时效性。基于图像的动物个体识别与行为分析技术效率高、时间成本低，已经成为新的监测发展趋势。已有研究提出，通过大熊猫面部图像的检测和分析，可实现个体识别和行为分类。但该方法依然存在检测精度不足导致识别准确率难以提升的问题。本文提出一种基于YOLOv3和Mask R-CNN的双模型融合方法，实现了大熊猫头部图像分割和精准检测。包含3个部分：YOLOv3完成头部检测，Mask R-CNN完成大熊猫轮廓分割，然后将两个模型的输出进行交并比融合。结果显示，头部检测准确率为82.6%，大熊猫轮廓分割准确率为95.2%，总体头部轮廓分割准确率为87.1%。该方法对大熊猫头部图像的识别率和分割准确率高，为大熊猫的个体识别、性别分类提供了帮助，为行为分析提供了技术参考。

摘要: 大熊猫脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)通过旁分泌所释放的外泌体在大熊猫保健与疾病治疗方面具有一定的应用前景。本研究旨在建立大熊猫UC-MSCs外泌体分离方法，开展生物学特征分析和分子鉴定，并研究UC-MSCs外泌体中miRNAs的种类与功能。采用超速离心法从大熊猫UCMSCs培养上清中成功分离外泌体，通过透射电子显微镜进行形态学观察，纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径大小，蛋白免疫印迹法检测特异性分子标记表达。采用Small RNA测序技术对UC-MSCs外泌体中的miRNAs进行鉴定，并对其靶基因进行了预测与功能分析。结果显示，大熊猫UC-MSCs外泌体呈圆形杯托状结构，直径为(79.15±4.81) nm，外泌体标志蛋白CD81与TSG101呈阳性表达而CALNEXIN呈阴性表达。大熊猫UC-MSCs外泌体中的miRNA主要为miR-148-3p (30.28%)与miR-21-5p (21.72%)。本研究首次从大熊猫UC-MSCs培养上清中分离出外泌体，并对其所含的miRNAs进行富集分析及功能预测，为大熊猫UC-MSCs外泌体后续的功能研究及应用奠定基础。