摘要: 本文通过PCR技术,直接从大熊猫基因组DNA上克隆得到其神经营养素-4的成熟肽编码序列,通过序列分析发现,该基因在进化上具有较高的保守性。将神经营养素-4成熟肽完整编码序列克隆至pGEX-4T-3表达载体,并经IPTG诱导在大肠杆菌中进行原核生物表达,获得了大熊猫重组蛋白神经营养素-4。重组表达蛋白经纯化后,进行大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞神经营养因子的活性鉴定,发现其能够诱导神经细胞分化产生突触,具有预期的生物学活性。对大熊猫神经营养素-4的基因工程研究,为大熊猫癫痫的基因治疗奠定了基础。

摘要: 卧龙和草坡自然保护区以保护大熊猫及其生态系统为主,面积3224km2,为中国大熊猫分布区最大的保护区。自1974年以来,我们经过多次调查,其栖息地由约2500km2缩减到现今约800km2。大熊猫在该地所选择的最适生境在海拔2800～3100m一带的三、四级夷平地带,面积约4×104hm2。大熊猫的种群数量,据1974年调查有195只(其中卧龙为145只),1983年冷箭竹大面积开花后种群有所下降,而上世纪90年代以后有所恢复,现在约有150只。在保护对策上,应在4个隔离种群间退耕还林,控制交通流量和禁止夜间通行,扩大保护范围到毗邻的县,对最适的栖息地实行绝对保护,并控制旅游规模及旅客流量。

摘要: 慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touch-down PCR分别扩增出TNNC1基因的cDNA序列和结构基因序列,并且构建了含有TNNC1 cDNA的重组表达载体,转化进入E.coli BL21进行超表达研究。结果表明大熊猫TNNC1基因的cDNA片段长602 bp,包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 831 bp,包含6个外显子和5个内含子。亚洲黑熊TNNC1基因的cDNA片段长486 bp,亦包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 758 bp,同样包含6个外显子和5个内含子。该两个物种的TNNC1基因与已报道的13种动物的TNNC1基因具有很高的相似性。拓扑预测表明,大熊猫和亚洲黑熊TNNC1蛋白有1个蛋白激酶C磷酸化位点,5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点,3个EF手性钙结合域及1个N-糖基化位点。将TNNC1基因在大肠杆菌中表达发现TNNC1蛋白与氮端多聚组氨酸标签蛋白(His6)融合成大小为23.5kD左右的多肽,这与预期结果相一致。本研究结果为进一步深入探讨大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因及蛋白的结构、功能和进化关系提供资料。

摘要: 大熊猫(Aluropoda melanoleuca)是举世瞩目的珍稀濒危动物,被誉为中国的国宝,越来越受到国内外各界人士的喜爱和重视。关于大熊猫的血液生理生化指标资料已有较多报道。Chen(1987)对6只大熊猫,王强等(1998)对18只大熊猫,

摘要: 以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(Canine distemper virus,CDV)为模板,构建犬瘟热病毒感染性cDNA克隆。对其全基因组序列测定后,用RT-PCR的方法获得组成全长基因的7个片段,通过酶切、拼接将7段CDVcDNA序列插入到真核表达载体pCI的MCS上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cDNA质粒(pCI-CDV-LP),同时分别克隆CDV小熊猫株N、P、L蛋白ORF构建三个辅助质粒。酶切鉴定和序列测定表明,pCI载体中插入的核酶及CDV cDNA序列正确无误,使用转染试剂Lipofectamine TM2000将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(BSR),经RT-PCR、间接免疫荧光和病毒感染VERO-SLAM细胞试验鉴定,成功拯救出CDV小熊猫株,显示CDV小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础。