摘要: 【目的】内参基因的选择在昆虫基因表达研究中尤为重要。本研究利用实时荧光定量PCR技术对5个候选内参基因在地熊蜂Bombus terrestris三型蜂的4种组织中的表达进行稳定性评价，筛选出地熊蜂相关基因表达定量研究的最佳内参基因。【方法】本研究针对GenBank数据库中地熊蜂Actin5C、PLA2（磷脂酶A2）、S18、S28、EF-1α（延伸因子）共5个候选内参基因的核酸序列设计并筛选出特异性引物；标记刚羽化出房的熊蜂工蜂、蜂王和雄蜂，放回原蜂群饲养，分别取1、3、5、7和10日龄蜂的头、卵巢、腹神经索和储精囊4个组织，提取总RNA；反转录PCR克隆候选内参基因片段；以TA克隆将候选内参基因片段克隆进T载体；含有内参基因片段的T载体经测序验证后，作为模板，通过实时荧光定量PCR，优化候选内参基因的扩增条件并绘制候选内参基因荧光定量扩增的标准曲线，在此基础上测定候选内参基因在地熊蜂三型蜂4个组织中的表达量，并以NormFinder、BestKeeper、GeNorm、ΔCT以及RefFinder 5种软件评价候选内参基因在三型蜂4种组织中的稳定性。【结果】不同软件对候选内参基因的稳定性排序具有一定差异，以RefFinder综合分析结果显示，蜂王和雄蜂头部、工蜂和雄蜂腹神经索、工蜂卵巢中最稳定的内参基因为PLA2，蜂王卵巢和工蜂头部最稳定的内参基因是Actin5C；蜂王腹神经索中EF-1α最稳定；雄蜂储精囊中最稳定的内参为S18。【结论】熊蜂内参基因的稳定性因熊蜂级型及组织而异。因此，在进行熊蜂相关基因表达研究时需要根据样本特性选择更稳定的内参基因，以确保结果的可靠性。

摘要: 【目的】熊蜂Hex70a作为一种重要的储存蛋白，为熊蜂的基础代谢和生长发育提供营养，尤其是在维持熊蜂蜂王滞育期间的营养代谢发挥着重要作用。本研究旨在制备Hex70a抗体，检测不同营养条件对熊蜂体内Hex70a表达的影响。【方法】利用生物信息学软件对地熊蜂Bombus terrestris Hex70a的疏水性、抗原性及亲水性等理化性质进行分析；设计制备Hex70a的抗体多肽，然后将合成的肽段与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联后免疫新西兰白兔，收集兔抗体血清，并利用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定抗体效价；分别用50%糖水、50%糖水与花粉混合物饲喂地熊蜂蜂王3 d时，利用Western blot检测Hex70a的表达量。【结果】Hex70a在第426-437位氨基酸序列亲水性及抗原性高于其他氨基酸序列片段；合成的多肽为CRYKMHQTPYNKD,免疫新西兰白兔后获得了Hex70a抗体，效价达到1∶256 000。Western blot结果显示，50%糖水与花粉混合物处理组检测到Hex70a的明显条带，具有较强的特异性，而50%糖水处理组没有检测到Hex70a任何条带。【结论】本研究成功制备了地熊蜂Hex70a抗体，能特异性识别地熊蜂Hex70a,为准确检测地熊蜂体内Hex70a表达量提供了可靠的检验工具，为检测熊蜂营养健康水平提供了一种有效的方法，并为进一步研究储存蛋白在熊蜂发育中的功能奠定基础。

摘要: 【目的】筛选用于定量地熊蜂Bombus terrestris抗菌免疫基因表达量变化的稳定内参基因。【方法】以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和大肠杆菌Escherichia coli侵染的地熊蜂成年工蜂和雄蜂肠道和脂肪体为对象，采用RT-qPCR技术，检测候选内参基因EF-1,EF-1α,GAPDH1,GAPDH2,S5,S18,S28,TUB,Argk和RP49的表达量；采用GeNorm, NormFinder和BestKeeper对上述候选内参基因的表达稳定性进行分析；使用RefFinder综合分析筛选合适的内参基因。【结果】地熊蜂成年工蜂前肠中表达最稳定的内参基因是GAPDH1和GAPDH2,适合成年工蜂中肠的内参基因为RP49和GAPDH2,适合成年工蜂后肠的内参基因的是EF-1和GAPDH2,适合成年工蜂脂肪体的内参基因是EF-1和S5。S18和GAPDH2为地熊蜂成年雄蜂前肠的理想内参基因，S5和EF-1为成年雄蜂中肠和脂肪体的理想内参基因，GAPDH2和S5为成年雄蜂后肠的理想内参基因。【结论】细菌的侵染可显著改变地熊蜂不同组织中部分内参基因的表达量，导致部分内参基因在不同免疫组织中表达不稳定。本研究结果对地熊蜂免疫应答及工蜂和雄蜂肠道与脂肪体的基因表达变化研究具有重要意义，为熊蜂抗菌免疫相关基因表达量研究奠定了基础。