摘要: 根据家蚕Bombyxmori和玉米夜蛾Helicoverpazea的性信息素合成激活肽基因序列 ,设计若干套引物 ,以烟实夜蛾Heliothisassulta基因组DNA为模板进行PCR扩增 ,得到 0 6 3kb的特异性DNA片段。该片段克隆进适当载体 ,序列测定和同源比较 ,查明烟实夜蛾的基因组中存在性信息素合成激活肽基因。烟实夜蛾的性信息素合成激活肽由 33个氨基酸组成 ,C末端是FXPRL结构 ,是目前发现的第 4种昆虫性信息素合成激活肽。在该神经肽第 14和第 15个氨基酸之间 ,插入一个 0 42kb的内含子。进一步的分析证明了烟实夜蛾的性信息素合成激活肽基因在潜成虫期的食道下神经节中表达

摘要: 利用RT-PCR技术从烟实夜蛾Helicoverpa assulta( Hass)雄虫触角中扩增得到了信息素结合蛋白3( HassPBP3)。克隆和测序结果表明,该基因核苷酸序列全长495 bp,编码164个氨基酸残基,预测分子量18.5 kD。并预测N-末端疏水区包含由22个氨基酸组成的信号肽。因此,成熟蛋白应包括142个氨基酸,预测分子量为16.1 kD,等电点为5.44。经氨基酸序列同源性分析发现,此序列与已知昆虫PBP3有较高的同源性,而且具有气味结合蛋白的典型特征。将该基因重组到表达载体pGEX-4T-2中进行原核表达。经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western印迹检测,结果表明烟实夜蛾PBP3基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约42 kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。

摘要: 利用RT-PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Helicoverpa assulta触角化学感受蛋白(chemosensory protein)的全长cDNA。克隆和测序结果表明,烟实夜蛾化学感受蛋白基因核苷酸序列全长384 bp(GenBank序列号: DQ285667) ,编码127个氨基酸残基,预测N-末端包含16个氨基酸组成的信号肽序列,因此估测其成熟蛋白分子量为12.97 kD,等电点为5.32。将该基因重组到表达载体pGEX-4T2中,并转入原核细胞中进行表达。SDS-PAGE和Western印迹分析表明,经IPTG诱导后,烟实夜蛾化学感受蛋白基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条约39 kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相符。

摘要: 利用RT PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Helicoverpaassulta雌、雄虫触角普通气味结合蛋白Ⅱ的cDNA片段 ,将其克隆至pGEM TEasy载体 ,获得了普通气味结合蛋白Ⅱ基因成熟蛋白阅读框序列。将该基因重组到表达型质粒pET 30a(+)中 ,并转化入原核细胞中表达。序列测定结果表明 ,烟实夜蛾触角普通气味结合蛋白基因的成熟蛋白阅读框全长 4 89bp ,编码 16 2个氨基酸残基 ,预测分子量和等电点分别为 18 2kD和 5 35。推导的氨基酸序列与已报道的 10种昆虫普通气味结合蛋白Ⅱ高度同源 (73% 98% ) ,并具有气味结合蛋白的典型特征。SDS PAGE和Western印迹分析表明 ,经IPTG诱导 ,普通气味结合蛋白Ⅱ基因能在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,电泳检测到一条约 2 3kD大小的外源蛋白 ,与预测的融合蛋白分子量大小相应。

摘要: 应用RT-PCR技术,从烟实夜蛾Helicoverpa assulta幼虫脂肪体组织和血细胞总RNA中反转录扩增脂肪酸结合蛋白(fatty-acid binding protein,FABP)基因的cDNA片段,克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达并进行检测。结果表明:扩增得到的片段全长399bp(GenBank登录号为DQ299942),编码132个氨基酸残基,预测分子量15.0kD,等点电5.83。FABP融合了GST。原核表达后经电泳检测到约41kD大小的外源蛋白,Western blot检测表明是目的蛋白。