摘要: 为了研究灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén与水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)互作机制,本研究构建了灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库。以实验室筛选的灰飞虱高带毒群体为材料,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,并连接三框型接头,层析柱分级纯化。采用同源重组反应制备三框型cDNA入门文库,再通过同源重组将入门文库转移到Gateway兼容载体pGADT7-DEST上,构建获得酵母双杂交cDNA文库。检测结果表明:文库库容量为3.68×107cfu,扩增文库滴度为2.62×1010cfu/mL;文库重组率大于95%,cDNA插入片段平均长度>1kb,达到了标准cDNA文库的要求。灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库的构建为开展昆虫介体与水稻条纹病毒互作机制的研究奠定了基础。

摘要: 为科学用药防治灰飞虱Laodelphax striatellus(Fallén)提供理论依据,采用麦秆浸渍法测定毒死蜱对灰飞虱成虫的室内活性,并用Parafilm小袋法和滤纸漏斗法测定毒死蜱亚致死剂量对灰飞虱蜜露排泄量、虫体增重、产卵量等指标的影响。Parafilm小袋法的测定结果表明,经毒死蜱亚致死剂量(0.21mg/L有效成分)处理的灰飞虱单雌蜜露分泌量和虫体增重分别比对照增加10.99%和22.22%,但与对照相比无显著差异(P>0.05);单雌产卵量为79.6±26.4个,比对照增加12.27%,差异达到极显著水平(P<0.01)。滤纸漏斗法的测定结果表明,处理过的灰飞虱雌成虫蜜露分泌面积为119.74±5.90mm2,比对照增加13.06%,差异达到显著水平(P<0.05)。毒死蜱亚致死剂量处理后对灰飞虱蜜露分泌量、虫体增重和单雌产卵量均表现不同程度的促进作用,说明毒死蜱亚致死剂量可能会导致灰飞虱致害性加剧。本研究结果对深入研究杀虫剂对灰飞虱种群的亚致死效应具有重要的参考价值。

摘要: WO噬菌体是侵染节肢动物体内感染的Wolbachia的细菌病毒,人们推测WO噬菌体可能参与了寄主遗传变异的过程。我们对采自中国境内4个地理种群(上海闵行、云南普洱、山东济宁和宁夏青铜峡)的灰飞虱Laodelphaxstriatellus12龄若虫用抗生素HCl-tetracycline处理过的水稻饲养,每隔20d取样测定并比较其体内Wolbachia和WO噬菌体的感染率,以此来初步研究灰飞虱体内WO噬菌体与Wolbachia的侵染关系,结果表明:WO噬菌体感染率的变化趋势与其宿主Wolbachia的基本一致,都随着时间推移逐步下降。我们进一步对未经HCl-tetracycline处理的灰飞虱,用实时定量PCR的方法对WO噬菌体和Wolbachia在不同日龄灰飞虱雌虫体内的菌量进行测定,结果显示,二者菌量都随着日龄的增长有所变化,在第8天达到最大,二者的变化趋势基本一致。由此我们推断WO噬菌体是侵染胞内共生菌Wolbachia的专性病毒,并且感染Wolbachia的WO噬菌体很可能是溶原性的噬菌体。

摘要: 水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)主要由介体昆虫灰飞虱Laodelphax striatellus以循回增殖型方式经卵传播,目前RSV与灰飞虱间的互作研究很少。为了研究RSV侵染对灰飞虱基因表达的影响,采用5条随机引物和3条锚定引物,利用mRNA差异显示(differential display RT-PCR,DDRT-PCR)技术分析了带毒和无毒灰飞虱种群基因表达差异。且利用正交实验优化了DDRT-PCR反应体系中的模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度及Taq酶用量。结果表明:最佳DDRT-PCR体系(25μL)为cDNA3.0μg,随机引物2.0μmol/L,锚定引物2.5μmol/L,dNTPs200μmol/L,Mg2+2.0μmol/L,Taq酶2.0U。mRNA差异显示共获得35条差异片段,选取其中6条经RNA斑点杂交验证,获得了4条阳性差异片段。其中3条阳性片段为带毒灰飞虱种群特异表达,分别与5-羟色胺受体1D、旋转酶B、60S核蛋白L40高度同源,无毒灰飞虱种群中特异表达的一条阳性片段在NCBI核酸数据库中比对无同源序列。DDRT-PCR优化体系的建立及部分差异片段的获得为进一步研究灰飞虱与RSV间的互作提供了帮助。

摘要: 为明确稻飞虱体内酵母类共生菌(yeast-like symbiont,YLS)的种类,采用超速离心的方法分离纯化灰飞虱Laodelphax striatellus(Falln)体内YLS,用真菌的通用引物对其18SrDNA、5.8S-ITSrDNA全长序列进行扩增。结果得到一条分子量约为2340bp的序列。序列同源性分析表明,该菌与Noda等所报道的类酵母菌的18SrDNA序列差异较大(同源性只有89.6%),而与季也蒙毕赤酵母Pichia guilliermondii有99.8%的同源性。原位杂交(ISH)和巢氏PCR均证明该菌存在于灰飞虱脂肪体和卵内,但数量较少。因此,灰飞虱体内YLS除了Noda等报道的类酵母菌外,尚存在另外一种季也蒙毕赤酵母菌。