摘要: 目的观察有氧运动、丰富环境及二者结合对孤独症谱系障碍(ASD)大鼠认知功能和海马组织中ASD易感基因NRXN1、NL3和Shank3表达的影响,探讨其纠正自闭症异常行为的效果及其可能机制。方法采用向Wistar孕鼠腹腔注射丙戊酸钠建立ASD大鼠模型,选取40只成功建模的子代大鼠随机分为有氧运动组、丰富环境组、有氧+环境组以及ASD模型组,每组10只;在常规饲养的母鼠所产子代中随机挑选10只作为空白对照组。有氧运动组大鼠接受持续8周、6次/周、每次在同一时间段、持续90 min的游泳运动干预;丰富环境组大鼠饲养于内有各种玩具、可供大鼠嬉戏玩耍的丰富环境饲养笼;运动+环境组接受运动干预,同时在丰富环境中饲养; ASD模型组和空白对照组不予干预。干预后,采用旷场实验和Morris水迷宫实验观察其行为学表现与改变;采用Western blot检测大鼠海马组织中NRXN1、NL3和Shank3蛋白表达情况;采用RT-PCR检测大鼠海马组织中NRXN1、NL3和Shank3的mRNA表达水平。结果与空白组比较,ASD模型组、有氧运动组、丰富环境组及有氧+环境组的穿格次数少(P<0.05)、逃避潜伏期长(P<0.05)、原平台象限活动时间缩短(P<0.05),NL3、NRXN1和Shank3蛋白的mRNA表达均明显降低(P<0.05);与ASD模型组比较,有氧运动组、丰富环境组及有氧+环境组的穿格次数明显增加(P<0.05)、逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)、原平台象限活动时间延长(P<0.05),大鼠海马组织中NL3、NRXN1、Shank3蛋白的mRNA表达均明显升高(P<0.05,有氧+环境组P<0.01);有氧运动组、丰富环境组及有氧+环境组相互比较,其穿格次数、逃避潜伏期、原平台象限活动时间与NL3、NRXN1和Shank3蛋白的mRNA表达均无显著性差异(P>0.05)。结论有氧运动、丰富环境及二者结合均可提高丙戊酸钠诱导的ASD模型大鼠的认知能力,一定程度纠正其异常行为,有氧运动结合丰富环境的干预效果优于单纯的有氧运动、单纯的有氧运动优于单纯的丰富环境。其作用机制可能与NRXN-NLGN-SHANK通路有关。

摘要: 目的探讨脑蛋白水解液(CHI)对七氟醚麻醉导致的大鼠学习记忆障碍的影响,并分析其可能作用机制。方法将32只大鼠随机分为七氟醚组、CHI高剂量组、CHI低剂量组和对照组,每组8只。七氟醚组吸入2%七氟醚,每天2 h,连续7 d,CHI高剂量组每天吸入七氟醚之前,尾静脉注射脑蛋白水解液1 200μL,CHI低剂量组每天吸入七氟醚之前,尾静脉注射脑蛋白水解液300μL。对照组不吸入七氟醚,尾静脉注射生理盐水。通过水迷宫实验记录大鼠学习记忆能力; HE染色法观察各组大鼠海马组织病理学改变; ELISA检测各组大鼠海马组织中MDA、SOD水平; TUNEL检测各组大鼠海马神经元细胞凋亡情况; RT-qPCR检测各组海马组织中SYT1 mRNA表达情况;Western blot检测各组大鼠海马组织中SYT1、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase3蛋白表达情况。结果与对照组相比,七氟醚组大鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.05),穿越平台次数显著减少(P<0.05),平台停留时间显著缩短(P<0.05),海马组织神经元细胞排列散乱,边界不清,细胞核固缩,出现空泡,着色较深,海马组织神经元细胞凋亡率显著升高(P<0.05),MDA、Bax、cleaved-Caspase3蛋白含量显著升高(P<0.05),SOD、Bcl-2、SYT1 mRNA和蛋白含量显著下降(P<0.05);与七氟醚组比,CHI高剂量组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),平台停留时间显著延长(P<0.05),海马组织神经元细胞排列相对紧密,胞核固缩和空泡现象得到改善,海马组织神经元细胞凋亡率显著下降(P<0.05),MDA、Bax、cleaved-Caspase3蛋白含量显著下降(P<0.05),SOD、Bcl-2、SYT1mRNA和蛋白含量显著升高(P <0.05);而CHI低剂量组大鼠各项指标与模型组比并无显著改善(P> 0.05)。结论七氟醚吸入前预先给予高剂量CHI能够改善七氟醚麻醉导致的大鼠学习记忆障碍,其机制可能与降低氧化应激损伤,抑制海马神经元细胞凋亡和增加SYT1表达有关。

摘要: 目的 比较不同固定液对光镜下金黄地鼠海马体神经元的影响，为金黄地鼠海马体神经元固定液的选择提供参考。方法 将21只11周龄雄性SPF级金黄地鼠随机分为7组，分别使用4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin’s、Carnoy、Davidson’s、Zenker、Helly溶液进行心脏灌注，剥离脑壳取出完整大脑，在对应的固定液中固定48 h,并制作成石蜡切片，经HE染色后在光镜下观察海马体神经元的形态特征。通过匈牙利3DHISTECH公司数字切片扫描系统测量尺测量神经元细胞直径，比较固定液对细胞收缩的影响。结果 4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin’s溶液展现了良好的固定效果，固定后的大脑硬度适中，HE染色后的切片着色适中、色泽鲜艳、神经元各种细胞形态对比清晰，4%多聚甲醛因固定后切片无龟裂而更为理想。不同固定液固定后的海马体神经元存在细胞收缩方面的极显著差异(P<0.01),使用Carnoy、Davidson’s固定后的神经元各种细胞收缩最严重。结论 4%多聚甲醛、10%中性甲醛、Bouin’s溶液是金黄地鼠海马体神经元较为理想的固定液，4%多聚甲醛溶液建议作为首选。

摘要: 为探讨凋亡抑制基因Bcl-2及Bcl-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CA1区神经元细胞保护中的作用,利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型,采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术,观测缺血预处理海马CA1区部分神经元病理组织学改变,细胞凋亡百分率及Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达的情况。结果发现,大鼠前脑缺血再灌注引起海马CA1区部分神经元发生凋亡,IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目,产生细胞保护作用,IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bcl-2及Bcl-x1蛋白的表达。结果提示,抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。

摘要: 应用酶消化及机械分离法分离出生10-15d的大鼠海马神经元,从形态学及电生理学方面鉴定细胞活性。结果表明,该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元。用0.5 μ mol／L的TTX阻断Na+通道后,分别记录到典型的全细胞电压依赖性钾离子通道电流以及延迟整流钾通道电流。证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究,对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。