摘要: 浮萍棘尾虫(Stylonychia lemnae)是一种营动物性营养的单细胞真核生物,是研究细胞学、遗传学问题的重要模式原生动物,而实现浮萍棘尾虫纯培养是开展棘尾虫生物学研究的重要基础。研究以建立高效棘尾虫无菌纯培养体系为目的,参考嗜热四膜虫无菌纯培养基,采用响应面分析方法,对氮源、碳源和磷酸氢二钾的组分配比进行单因素实验和正交实验,初步建立用于浮萍棘尾虫无菌培养的培养基,并分别对培养温度、初始pH、培养液添加量和起始接种密度等培养条件进行了优化。结果表明:起始接种量为100 cells,培养基10 mL,初始pH 7.0,温度25℃,静置培养168h,可获得最大细胞数量约为3.0×10~3 cells。

摘要: 为研究腺苷酸基琥珀酸合成酶(Adenylosuccinate synthase,简称Adss)在原生动物中的作用,对浮萍棘尾虫(Stylonychia lemnae)腺苷酸基琥珀酸合成酶Adss基因进行PCR克隆,获得全长为1396 bp左右的序列,其编码458个氨基酸,保守结构域含有一个P-loop NTPase结构域,蛋白结构预测Adss蛋白是由α-螺旋、β-折叠和无规卷曲组成的复杂结构。多重序列比对和系统进化分析显示浮萍棘尾虫Adss蛋白与第四双小核草履虫、多子小瓜虫和嗜热四膜虫等纤毛虫同源性较高。通过克隆浮萍棘尾虫Adss基因的启动子序列,并采用增强型绿色荧光蛋白EGFP作为报告基因,构建了启动子序列调控的表达载体pEGFP-N1-Adss,通过转染细胞确定浮萍棘尾虫Adss蛋白定位于细胞质中。文章报道了原生动物纤毛虫Adss基因,证实浮萍棘尾虫Adss蛋白属于典型的真核生物Adss,为进一步揭示Adss在单细胞真核生物中的作用机制提供了新的参考。