摘要: 为提升杀虫剂防效,减少杀虫剂用量,提高农产品安全,本研究采用虫体浸渍法研究了阳离子助剂1227和C8-10及有机硅助剂Breakthru S240对高效氯氰菊酯、毒死蜱和溴虫腈在甜菜夜蛾Spodoptera exigua幼虫和棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫上的增效作用,并测定了3种助剂对清水物理性状的影响。结果表明:(1)供试助剂在两试虫上对3种杀虫剂均有显著增效作用,且增效比与助剂浓度存在显著相关关系。相同浓度下,除Breakthru S240对毒死蜱在棉铃虫上增效作用高于1227外,3种助剂在两试虫上对3种杀虫剂增效作用均为C8-10>1227>BreakthruS240。3种助剂在甜菜夜蛾上对3种杀虫剂的最佳增效浓度均为900mg/L。3种助剂在棉铃虫上对3种杀虫剂的最佳增效浓度分别为900,300和900mg/L。(2)3种助剂对清水物理性状均有显著影响。相同浓度下,供试助剂对清水表面张力的降低能力、对扩展直径和最大稳定持留量的增强能力均为Breakthru S240>1227>C8-10。综上所述,阳离子助剂1227和C8-10对3种杀虫剂在两试虫上的增效作用显著高于有机硅助剂Breakthru S240,但后者对于提高杀虫剂在叶表沉积量的能力高于前者,研究结果为3种助剂在杀虫剂领域的应用提供了一定的依据。

摘要: 中肠是苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)发挥作用的主要部位,中肠上很多蛋白被认为是Bt毒素的结合蛋白。为了探索棉铃虫Helicoverpa armigera对Bt的抗性机制,我们运用RNA转录过程中的5'末端转换机制(Switching Mechanism at5'end of the RNA Transcript,SMART)技术构建了棉铃虫中肠的cDNA文库。先提取棉铃虫5龄幼虫中肠组织的总RNA,合成双链cDNA,经过均一化处理后,酶切、连接载体、转化到大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞,最后进行滴度测试、文库扩增并进行EST序列测定。对该文库质量分析表明:文库滴度为2×106pfu/mL,重组率为100%,平均插入片段大于1kb,全长率为50%。最终成功得到1098条表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)序列,经Phrap程序聚类拼接后得到789条单基因簇(unigene),包括132个重叠群(congtigs)和657个单拷贝(singlets)。将聚类拼接后的789条ESTs序列在NT,NR和SWISSPORT库中进行本地化搜索,比对后发现:218条序列(27.62%)没有注解;119条序列(15.08%)注解不明确;452条序列(57.29%)有功能注解,并表达300多种基因产物。构建的文库各项指标均达到要求,该文库的构建为棉铃虫中肠各类基因的克隆及功能分析奠定了基础。

摘要: 为了研究棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)在嗅觉识别过程中的功能,本研究克隆并在原核细胞中表达了棉铃虫化学感受蛋白HarmCSP6,Western blot和快速液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)检测证实该HarmCSP6蛋白以二聚体的形式表达。实时荧光定量PCR检测发现HarmCSP6基因在雌雄虫触角中表达量很高,在雌虫足及翅中也有一定程度的表达。该二聚体蛋白与22种气味分子的荧光竞争结合实验结果表明,该蛋白与醛类及萜烯类等气味小分子具有较强的结合能力。通过研究该蛋白与小分子的结合,筛选出合适的气味,从而为开发棉铃虫引诱剂及驱避剂提供理论依据。

摘要: 为明确球孢白僵菌在不同感染方式下对棉铃虫的侵染能力,采用饲喂法和浸渍法测定了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hbner)2龄幼虫的致病力,并通过组织切片显微技术、扫描电镜技术观察了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫的致病方式。结果表明:白僵菌HFW-05可通过消化道(饲喂法)成功侵染2龄棉铃虫,接种感染6d后的校正死亡率为75.8%。经由体表(浸渍法)接种白僵菌HFW-05的试虫,试验中体重的变化和取食量与对照相近(6d校正死亡率仅为17.3%,不能通过体表达到致病效果)。组织病理学变化表明:26±1℃条件下,HFW-05菌株对棉铃虫以消化道侵染为主,侵染后可导致寄主中肠微绒毛脱落严重,肠壁组织溶解并最终只剩余底膜;马氏管变形萎缩,边缘向外突出隆起,管径变大;脂肪体萎缩解体,结构松散;表皮下的细胞被菌丝侵染破坏。浸渍法接种的试虫,切片观察处理6d后试虫,体内未发现菌丝,肠壁组织正常完整。扫描电镜观察,浸渍法接种的分生孢子未能穿透棉铃虫表皮,而是贴于寄主表皮表面生长,在湿度合适的条件下,菌丝生长到一定时间后断裂成为芽生孢子。白僵菌HFW-05可经由消化道对棉铃虫达到较高的致病效果,在一定程度上弥补外界环境对白僵菌侵染的不利影响,对今后应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。

摘要: 围食膜是昆虫中肠上皮细胞分泌形成一层特有的非细胞性半透膜,肠粘蛋白是其重要的组成成分。本研究利用棉铃虫Helicoverpa armigera围食膜蛋白多克隆抗体免疫筛选棉铃虫中肠cDNA表达文库,共获得385个阳性克隆,经DNA测序和序列对比,确认其中之一为编码棉铃虫中肠围食膜肠粘蛋白的cDNA克隆HM72。序列分析显示,该cDNA全长为2888bp(GenBank登录号:HM017910),其中ORF长2469bp,编码823个氨基酸,包含起始密码子ATG和终止密码子TAA,在poly A末端上游19bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AATTAA。氨基酸序列分析表明,其N-端含有16个氨基酸的信号肽,预测分子量为84.2kDa,等电点3.63,为酸性蛋白质。结构域分析表明,该蛋白具有5个几丁质结合功能域,一个粘蛋白结构域和两个甘氨酸-天冬氨酸富集区,该基因成功表达100kDa的目的蛋白。Western blot分析表明,HM72蛋白存在于棉铃虫中肠、围食膜、粪便及蜕中,并由整个中肠分泌,而在棉铃虫脂肪体、体壁、马氏管、唾腺、消化液、血淋巴中没有检测到HM72蛋白。本研究为棉铃虫生物防治相关功能基因的深入研究以及完善昆虫围食膜理论等提供了依据