摘要: 蜕皮调节转录因子 (hormonereceptor 3,HR3)在昆虫蜕皮过程中启动蜕皮相关早期基因簇表达 ,并抑制蜕皮相关晚期基因簇表达 ,对昆虫蜕皮级联反应起着关键的调控作用。利用合成的特异性引物通过RT_PCR扩增了棉铃虫Helicoverpaarmigera蜕皮调节转录因子 (HHR3) ,并与pGEX_4T_1载体连接 ,在大肠杆菌EscherichiacoliDH5α内进行扩增 ,经过PCR筛选获得了HHR3_pGEX_4T_1重组质粒。用该质粒转化大肠杆菌表达菌株BL2 1并进行诱导表达 ,获得了与谷胱甘肽_S转移酶 (GST)融合表达的HHR3包涵体 ,分子量在 94kD左右 ,通过无离子去垢剂CAPS(3_[cyclohexylamino]_1_propanesulfonicacid)变性、复性后获得了可溶性GST_HHR3融合蛋白 ,经凝血酶裂解和SDS_PAGE分离得到纯化的HHR3,经蛋白质N_端测序确认表达正确。用重组表达的HHR3免疫家兔 ,制备了兔抗HHR3多克隆抗体 ,免疫印迹检测显示该抗体对HHR3有特异性识别能力 ,可以用于HHR3功能与调控等下游研究。免疫印迹检测结果还表明 ,HHR3在 5龄向 6龄蜕皮的幼虫脂肪体中高表达 ,在进入 6龄 2 4h的幼虫脂肪体中含量明显下降 ,在 6龄 72h的幼虫中肠中没有检测到HHR3表达 ;成虫卵巢中有HHR3表达。

摘要: 以常规棉泗棉 3号作为对照 ,采用酶联免疫生测法 (ELISA)和室内生物测定法 ,研究了转Bt基因棉新棉 33B和GK 12不同组织器官中Cry1Ac或Cry1Ab毒蛋白的表达及其向靶标害虫 (棉铃虫 )、非靶标害虫 (棉蚜 )以及天敌 (龟纹瓢虫 )的传递和影响。研究结果表明 ,新棉 33B各组织器官中Bt毒蛋白的表达量较高 ,为 79 7 1390 0ng g鲜重 ,GK 12较低为 16 5 2 6 4 0ng g鲜重。在花盛期 ,新棉 33B各组织器官中Bt毒蛋白的表达量依次为 :柱头、花药 >子房、花瓣 >群尖 ;而 5 7叶期的初展嫩叶、现蕾初期的幼蕾及花铃期的幼铃表达量相当 ,而且与花盛期群尖的表达量没有明显区别。同样处于花盛期的GK 12 ,其各组织器官中Bt毒蛋白的表达量依次为 :花药 >柱头 >花瓣 >群尖 >子房 ;而 5 7叶期的初展嫩叶、现蕾初期的幼蕾及花铃期的幼铃表达量相当 ,而且与花盛期群尖的表达量没有明显差异。常规对照棉的幼铃、花药、柱头以及子房中痕量Bt毒蛋白的存在可能与传粉昆虫等的活动有关。在转Bt基因棉田采集的棉蚜和棉铃虫老龄幼虫 ,其体内均可检测到Bt毒蛋白 ;在新棉33B棉田采集的龟纹瓢虫幼虫和成虫体内也可检测出Bt毒素。当以Bt棉田的棉蚜饲喂龟纹瓢虫时 ,龟纹瓢虫的生长发育、存活以及繁殖等基本没有受到影响。

摘要: 20 0 0年 7月中旬和 8月中旬 ,分别测定了采自田间的转CpTI Bt基因双价抗虫棉 (SGK32 1,以下简称CpTI Bt棉 )和转Bt基因抗虫棉 (中 30 ,以下简称Bt棉 )对棉铃虫 Helicoverpaarmigera幼虫存活、生长的影响。结果表明 :7月中旬两种转基因抗虫棉抗虫效果均较好 ,尤其是CpTI Bt棉棉叶和花瓣对 4龄幼虫 3天内致死率为 92 %以上 ;8月中旬两种转基因棉的抗虫活性均明显降低 ,且Bt棉的杀虫活性显著低于CpTI Bt棉 ,其幼虫死亡率与对照受体棉中 16的死亡率之间无显著差异 ,仅显著抑制了幼虫的生长 ;石远 32 1(SGK32 1受体品系 )的花瓣具有一定的抗虫活性 ,可显著降低取食幼虫的体重 ,甚至造成部分幼虫死亡 ;CpTI Bt棉中 ,花瓣和棉叶的抗虫性明显高于蕾和铃心。对 5龄幼虫取食棉铃 1日后的营养指标测定结果显示 :两种转基因抗虫棉处理的幼虫相对生长率和相对取食量均显著低于石远 32 1,但两者之间无显著差异 ;CpTI Bt棉处理的幼虫近似消化率显著低于石远 32 1和Bt棉 ,但其食物利用率显著高于石远 32 1和Bt棉

摘要: 用全细胞膜片钳技术研究了生物碱类植物杀虫剂苦参碱对棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫离体培养中枢神经细胞钠离子通道门控过程的影响。结果表明 :苦参碱对棉铃虫幼虫神经细胞所表达的TTX (tetradotoxin ,河豚毒素 )敏感钠通道具有浓度依赖性阻滞作用 ,1,10和 10 0 μmol L的苦参碱作用 5min后 ,分别使钠电流峰值较给药前下降 (12 4 9± 1 6 7) %、(18 79±2 16 ) %和 (4 3 15± 8 17) % (n =8,P <0 0 5 )。苦参碱使钠电流的电流 电压关系曲线上移 ,但并不改变其激活电压、峰电压和电流 电压关系曲线的形状。苦参碱对钠通道的阻滞作用可能是其具有某些毒理效应的离子基础

摘要: 以取食转Bt基因棉的棉铃虫和取食转Bt基因棉上的蚜虫的异色瓢虫为研究对象 ,结合各自的适合度参数考察了波动性不对称 (fluctuatingasymmetry ,FA)在不同种群中各对称性状间的表现情况。结果表明 :处理组棉铃虫种群的前、中、后足腿节 ,前翅肘横脉 ,前翅副室短径 ,后翅翅长均表现出FA ;与对照种群比较 ,前足腿节与后翅翅长的FA值较高。适合度参数测定结果显示 ,棉铃虫卵孵化率与成虫寿命显著低于对照种群 ,而成虫产卵量和幼虫发育历期与对照种群差异不显著。异色瓢虫取食了转Bt基因棉上的蚜虫后对其适合度各参数及各虫龄的捕食功能反应均无不良影响 ,其后翅翅长表现出FA ,但与对照种群的FA值无显著差异。FA的大小与种群适合度间存在一定的联系 ,尚需做进一步的分析