摘要: 为深入研究棉铃虫Helicoverpaarmigera细胞色素P450的结构与功能,需要分离不同型的P450蛋白。作者建立了适用于棉铃虫中肠微粒体P450的纯化方法,包括聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀、高效疏水作用色谱(HPHIC)和高效离子交换色谱(HPIEC)等连续分离步骤。SDS_PAGE(银染)显示,棉铃虫中肠微粒体经以上步骤分离纯化后,在含P450的馏分中检测出分子量分别为58kD、47kD、56kD和45kD的4条蛋白带。P450的回收率为14.3%,比含量提高了39倍。

摘要: 通过对棉铃虫Helicoverpaarmigera(H櫣bner)幼虫中肠氨肽酶N的克隆和测序,鉴定了1个氨肽酶N基因APN1,其cDNA序列具有3220个核苷酸,具有3042bp的开放阅读框,编码产生1014个氨基酸的蛋白质。其推定的氨基酸序列具有氨肽酶N所共有的锌结合模体HEXXHX18E和N末端20个氨基酸的疏水性信号序列,但C末端没有糖基磷酯酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚添加信号序列。该氨肽酶N的cDNA序列已提交GenBank,登录号为AY358034。

摘要: 用含Bt毒素的人工饲料饲养棉铃虫Helicoverpaarmigera3龄幼虫至成虫(死亡率为40%50%),采用触角电位(electroantennogram,EAG)技术,测定了雄蛾对雌蛾性信息素2种组分顺9十六碳烯醛(Z916:Ald)、顺11十六碳烯醛(Z1116:Ald)及其混合物(Z1116:Ald∶Z916:Ald=97∶3)的EAG反应。结果表明,Bt毒素对雄蛾感受性信息素单一组分和混合物的EAG反应均具促进作用;且随信息素剂量的增加,这种促进作用也随之增强。这一结果对于评价和实施延缓棉铃虫对Bt棉抗性的“庇护所”策略,具有一定的参考意义。

摘要: 通过用聚乙烯亚胺 (PEI)、硫酸铵、聚乙二醇 (PEG) 沉淀技术和 GSH_Sepharose 4B 亲和柱对棉铃虫 Helicoverpaarmigera (Hübner) 幼虫中谷胱甘肽S_转移酶进行了部分纯化研究。结果表明PEG10000 和PEG20000 的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果。通过PEI沉淀去核酸后, 再用硫酸铵沉淀, 中肠和脂肪体GST活性分布在70%75%和60%65%沉淀段,比活力分别为1081. 49和596.41 nmol (min·mg), 纯化倍数分别为2 53和2 2。在6种PEG中, PEG10000和PEG20000的纯化效果较好。在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%45%和30%40%, GST比活力分别为795.11和1.080 18 nmol (min·mg), 纯化倍数分别是2 4和3 97。PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%40%和25%45%, 比活力分别是767.57和945.96 nmol (min·mg), 纯化倍数分别是2.81和3. 05。用GSH_Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5.888 44 nmol (min·mg), 纯化倍数达到107.38。

摘要: 采用经典的CO差光谱方法测定棉铃虫Helicoverpa armigera细胞色素P450含量时发现, 同一样品的多次平行测定结果间差异显著。进一步研究表明测定时通入CO后的间隔时间不同, 计算出的P450含量存在116倍的差异。多次连续扫描结果表明A450nm-490nm与通入CO后到扫描的时间间隔呈钟形曲线, 说明CO与P450的结合需要一定的时间, 以A450nm-490nm最大值计算P450含量最为准确。