摘要: 目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件,为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24 h后贴壁,6 d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2～3 d可传代1次;细胞接种3～6 d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。

摘要: 目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用DMEM/F12,M199,Ham’s F12/M199三种培养液以确定树鼩CECs原代细胞最适培养液。使用TGF-β抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩CECs纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶(NES)设计并筛选特异性引物,使用PCR方法检测细胞NES表达情况并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs细胞。Ham’s F12/M199培养液是树鼩CECs的最适培养液。使用TGF-β抑制剂可以达到CECs的纯化目的。结论优化的树鼩CECs细胞培养纯化方法对树鼩CECs的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合CECs的一般特征。

摘要: 从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记。检测了6只动物共计274 278 568条unigene(总长度43 138 417 bp)序列信息后,在262 980条unigene(5.75%)中发现SNP位点263 071个,SNP发生频率为1/164 bp,其中转换(transition)177 562个,颠换(transversion)85 509个。在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85%和33.66%。将包含SNP位点的262 980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGGpathway),结合已有研究,分别筛选到1 187个有GO注释、77个有COG注释和1 080条个有KEGG通路注释的脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记。

摘要: 目的探索低频电刺激对中国树鼩死亡后脏器中激素水平的影响。方法给予中国树鼩低频电刺激,分别于死亡后0 h、3 h、6 h、12 h、18 h、24 h、36 h和72 h取甲状腺、肝脏、脾脏,用放射免疫法测定内皮素(endothelin,ET)、心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)、血栓素(thromboxane,TX)水平;剥取死后0 h中国树鼩中脑腹侧背盖区(ventral tegmental area,VTA)检测c-fos表达。结果电刺激后,中国树鼩尸体脏器中内皮素、心钠素、血栓素水平比对照组显著升高,其含量随死亡后时间的延长而降低,且呈现一定的趋势;VTA c-fos表达明显增强。结论低频电刺激能引起中国树鼩脏器中激素的合成、释放和脑组织c-fos表达。

摘要: 目的诊断导致树鼩(Tupaia belangeri)腹泻的肠道致病菌,为疾病预防和控制提供参考。方法采集6只腹泻树鼩新鲜粪便,按常规肠道细菌鉴定方法进行分离培养,观察细菌形态和各菌种比例,对优势可疑菌进行生化和分子生物学鉴定,并进行了8种常用抗菌素的敏感试验。结果培养菌落在营养琼脂培养基上多数呈黄白色,表面光滑湿润;在S.S琼脂培养基上菌落为圆形、中心发黑,有的蔓延成黑色波纹状且有臭味。细菌形态为两端钝圆短杆菌,大小为(0.4—0.6μm)×(1.0—3.0μm),无芽孢和荚膜,革兰氏染色阴性,非抗酸菌。生化鉴定该分离株产硫化氢,鸟氨酸、尿素等反应阳性。核酸扩增后与GenBank中奇异变形杆菌相似度达99%。鉴定为奇异变形杆菌。该分离株对左氧氟沙星、环丙沙星等8种药物均敏感。结论作为条件致病菌的奇异变形杆菌能够引起哺乳期母树鼩和仔树鼩腹泻甚至死亡。实施针对性的饲养管理和药物治疗,可有效地控制该疾病的传播。