摘要: 目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急性PD模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。结果成功建立树鼩急性PD模型。建模1 d后,与对照组树鼩相比,模型组树鼩空间利用指数下降、低运动性出现次数(BLM)指数显著升高(P均<0.001),表明模型组空间利用能力受损、活动度下降;模型组右前爪(RF)、左前爪(LF)最大接触面积减少, RF、LF和右后爪(RH)爪印最大接触面积平均压力,以及RF、RH、LF爪印平均压力及四肢平均力量均下降(P均<0.05),反映了树鼩肌肉僵硬度升高,可以作为PD步态分析的定量指标; 0～15 Hz(TI1)震颤显著增强(P<0.01),能较好模拟PD患者静止性震颤的临床表现。结论MPTP致树鼩急性PD模型能较好模拟PD早期的临床表现。Catwalk、FDA检测系统可提供系统、客观、可靠的PD行为学数据。

摘要: 目的 通过原核表达和纯化得到树鼩Vasorin(VASN)重组蛋白，以此蛋白免疫小鼠制备抗树鼩VASN单克隆抗体，并初步评估其应用价值。方法 采用反转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）法体外扩增树鼩VASN基因全长序列，将树鼩VASN基因片段插入到p ET-30a载体中，构建pET-30a-VASN重组质粒，用Bam HⅠ和SalⅠ对重组质粒进行双酶切鉴定，并通过测序进一步鉴定其正确性；将测序正确的重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl β-Dthiogalactoside,IPTG）诱导表达重组蛋白VASN；通过SDS-PAGE分离蛋白VASN，并利用KCl纯化重组蛋白VASN；用纯化的重组蛋白VASN对BALB/c小鼠进行4次免疫，并通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测小鼠血清抗体效价；取血清抗体效价达到1∶10 000以上的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，先利用含黄嘌呤、氨基蝶呤及胸腺嘧啶核苷（hypoxanthine-aminopterin-thymidine,HAT）的培养基筛选杂交瘤细胞，随后通过ELISA筛选出能够分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株，并通过有限稀释法进行亚克隆，获得单克隆杂交瘤细胞株；通过腹水诱生法制备大量VASN单克隆抗体，利用rProtein G纯化抗体，采用ELISA和蛋白质印迹法检测单克隆抗体的结合常数和体外反应的特异性。结果 成功扩增出树鼩VASN基因并构建了树鼩pET-30a-VASN重组质粒，重组质粒经测序得到的序列与树鼩VASN目的基因序列完全一致；重组蛋白VASN主要以包涵体的形式存在，纯化后的蛋白纯度达到90%，符合后续免疫实验的要求；利用重组蛋白VASN 4次免疫小鼠后，小鼠血清抗体效价达1∶729 000；利用杂交瘤技术及有限稀释法获得单克隆阳性杂交瘤细胞株，通过腹水诱生和纯化得到单克隆抗体，ELISA测定单克隆抗体的结合常数值达2.59×10～7 L/mol；蛋白质印迹法结果显示，树鼩VASN单克隆抗体能与树鼩VASN重组蛋白结合，与猪视黄醇结合蛋白4重组蛋白、人源VASN-富含亮氨酸重复序列重组蛋白以及牛血清白蛋白均无结合反应；而抗树鼩VASN单克隆抗体能特异性识别树鼩心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉组织中的VASN蛋白，且条带明显、背景清晰。免疫组织化学检测结果显示，该单克隆抗体可以识别蛋白VASN mRNA表达水平较高的树鼩脾脏、肺脏和树鼩永生化成纤维细胞中的VASN蛋白。结论 成功制备了抗树鼩VASN的单克隆抗体，该抗体可用于树鼩永生化成纤维细胞、树鼩脾脏组织和肺脏组织的免疫组织化学检测，为进一步探索VASN在树鼩模型中的功能提供了重要的工具。

摘要: 目的 探究登革病毒（dengue virus,DENV）对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特征，为扩充DENV的树鼩易感细胞库提供依据。方法 将DENV以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为0.02的剂量分别接种于树鼩皮肤成纤维细胞（tree shrew skin fibroblasts,TSFs）、原代树鼩肾上皮细胞（primary tree shrew renal epithelial cells,p TRECs）、树鼩主动脉内皮细胞（tree shrew aortic endothelial cells,TAECs）、树鼩主动脉平滑肌细胞（tree shrew aortic smooth muscle cells,TASMCs）、树鼩肝细胞（tree shrew hepatocytes,THs）、树鼩角膜基质细胞（tree shrew corneal stromal cells,TCSCs）、树鼩脑微血管内皮细胞（tree shrew brain microvascular endothelial cells,TBMECs）及树鼩视网膜微血管内皮细胞（tree shrew retinal microvascular endothelial cells,TRMECs），用常规培养DENV的C6/36、Vero、A549及BHK-21细胞系作为阳性对照。在感染病毒后6 d内，每12 h用倒置显微镜观察各种细胞的病变效应，用实时荧光定量PCR检测细胞培养物中病毒核酸载量，绘制病毒增殖曲线，用噬斑实验检测病毒滴度。结果 除TRMECs外，DENV对7种树鼩细胞均易感。随着感染时间的延长，7种树鼩细胞均出现变圆、脱落、坏死及裂解等明显的病变效应。在pTRECs、TBMECs、TASMCs、TAECs和THs这5种树鼩细胞的培养裂解物中检测到的病毒核酸载量与4种阳性对照细胞接近，大于4×10～7拷贝/μL。以上5种树鼩细胞均能产生感染性子代病毒，其中3种树鼩细胞TAECs (3.13×10⁵PFU/m L)、THs(2.03×10⁵PFU/m L)、p TRECs （1.58×10～5 PFU/m L）中的DENV滴度较接近阳性对照细胞C6/36 （3.85×10～5 PFU/m L），且能更早收获病毒。结论 DENV对树鼩多种组织来源的细胞易感，且病毒增殖速度快于常见其他物种来源的传代细胞系，其中TAECs、THs和p TRECs尤其适于DENV增殖培养。同时，这些细胞可能参与DENV在树鼩体内的感染。

摘要: 目的 研究树鼩乳腺肿瘤发生、发展过程中代谢组学的变化，探讨机体代谢物质改变与肿瘤发生、发展的密切关系，以期筛选出反映乳腺肿瘤病情进展的生物标志物。方法 通过连续3次、每次间隔15 d的方式给20只树鼩每只灌胃7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethylbenzoanthracene,DMBA） 0.15 mg/kg，并添加高脂高糖饲料，诱导实验观察24个月或直至树鼩生成乳腺肿瘤。使用气相色谱-飞行时间质谱联用技术（gas chromatography-timeof-flight mass spectrometry,GC-TOFMS）对DMBA诱导发生乳腺肿瘤的树鼩、DMBA诱导未发生乳腺肿瘤的树鼩以及未诱导正常树鼩（12只）的血清代谢物进行非靶向测定，通过主成分分析（principal component analysis,PCA）、正交偏最小二乘法分析（orthogonal partial least squares analysis,OPLS-DA）等多维统计分析，进一步结合t检验进行组间差异比较，以VIP>1且P<0.05的标准筛选差异性代谢物，并结合HMDB在线数据库对显著变化的差异代谢物进行鉴定，最后应用京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genesand Genomes,KEGG）通路数据库富集代谢相关基因调控通路。结果 DMBA诱导后树鼩的乳腺肿瘤发生率为40%(8/20)。DMBA造模成瘤组与正常对照组相比，树鼩血清中检测到有30种代谢差异产物，其中18种下调，12种上调，差异均具有统计学意义（VIP>1,P<0.05）;KEGG通路分析发现，谷氨酸代谢、甘油酯代谢、柠檬酸循环、丙氨酸代谢这4个代谢通路发生显著改变。DMBA造模成瘤组与DMBA造模未成瘤组相比，检测到有18种代谢差异产物，其中7种下调，11种上调，差异具有统计学意义（VIP>1,P<0.05）;KEGG通路分析发现，柠檬酸循环、谷氨酸代谢这2个代谢通路发生显著改变。DMBA造模未成瘤组与正常对照组相比，检测到有31种代谢差异产物，其中14种下调，17种上调，差异具有统计学意义（VIP>1,P<0.05）;KEGG通路分析发现，柠檬酸循环、谷氨酸代谢、甘油酯代谢这3个代谢通路发生显著改变。结论 代谢组学分析可展示乳腺肿瘤树鼩血清中代谢产物的变化特点，结果提示谷氨酸代谢、甘油酯代谢、柠檬酸循环、丙氨酸代谢途径与高脂高糖饮食下DMBA诱导树鼩乳腺肿瘤的发生与发展有相关性，这为进一步研究乳腺肿瘤发病的生物机制奠定了基础。

摘要: 利用界面铺张—硝酸银染色技术,对树鼩精母细胞联会复合体进行了电镜观察。结果表明,常染色体联会复合体的相对长度和着丝点指数与体细胞染色体的相应参数具有很好的吻合性。性染色体联会复合体的形态和行为与灵长类的十分相似,并对此进行了比较和讨论。