摘要: 为探讨松材线虫Bursaphelenchus xylophilus和拟松材线虫Bursaphelenchus mucronatus在菌食和植食阶段的种群繁殖力对环境温度的响应及其与种群致病力的关系，本研究对不同致病力的松材线虫和拟松材线虫，通过单异活体培养(菌食)和接种寄主黑松(植食)两种方式，探讨了不同温度条件下线虫种群孵化率、繁殖量和后代性比等繁殖参数的变化情况。结果表明，在单异活体培养时，供试的松材线虫强毒和弱毒虫株以及拟松材线虫有毒和无毒虫株在25℃下均具有最高的卵孵化率；不同致病力的松材线虫和拟松材线虫种群具有不同的最适生长温度，松材线虫强致病力虫株ZJ在35℃出现最大繁殖量，弱致病力虫株YW4在30℃下繁殖最多，而拟松材线虫无致病力虫株JNL10和有致病力虫株15#则在25℃下繁殖量较大。但总体来看，在25～35℃下，松材线虫ZJ虫株和YW4虫株繁殖量无显著性差异，而拟松材线虫JNL10虫株和15#虫株的繁殖量具有显著差异。在寄主体内，15～20℃时松材线虫ZJ虫株和YW4虫株繁殖量无显著性差异，25～35℃时，松材线虫ZJ虫株的繁殖量明显高于YW4虫株；而在各个温度下，拟松材线虫繁殖量基本低于松材线虫弱毒虫株YW4且远远低于强毒虫株ZJ。在单异活体培养下大部分经不同温度处理线虫种群的雌雄性比都大于2.0;而在寄主黑松体内各个虫株的种群性比均低于1.5,其中松材线虫种群的雌雄性比多数低于1.0,且随着温度的升高(15～30℃)出现先上升后下降的趋势；拟松材线虫各处理的种群雌雄性比在1.0～1.5之间，且随着温度的上升而上升。表明在不同温度下，单异活体培养阶段的松材线虫和拟松材线虫的种群增长与其致病力不呈相关性；而在寄主体内，不同温度条件下的松材线虫和拟松材线虫的繁殖力与其致病性存在正相关关系，致病力越强的虫株，其繁殖力越大。

摘要: 采用黑松(Pinusthunbergii)无菌苗和愈伤组织的接种试验证明,松材线虫携带的洋葱伯克霍尔德氏菌(Burk-holderiacepacia)B619菌株的繁殖及对黑松的致病性受松材线虫的影响.进一步的研究表明,松材线虫的分泌物及死尸均可促进该菌株的生长繁殖和致病作用,且活线虫的促进作用比死尸更加显著,这可能是由于松材线虫提供给该菌株某些重要的营养物质.试验还发现,松材线虫分泌液经高温处理后对致病细菌繁殖的促进活性下降.表5参18

摘要: 以质粒pACYC184为材料,研究了松材线虫携带的荧光假单胞菌的最适电转化条件.结果表明,荧光假单胞菌GcM5-1A培养至D600nm为0.5时制备感受态细胞,以300mmol/L蔗糖溶液为电击缓冲液,质粒DNA终浓度为0.01ng/μL,在25μF电容、9kV/cm电场强度、200Ω电阻的电击条件下电击一次,可得最大的电转化效率,即5.5×106/μg(DNA).SDS-PAGE分析显示,转化质粒pACYC184的氯霉素抗性基因在受体细胞内得到了表达.本方法的建立为松材线虫携带的荧光假单胞菌的基因导入提供技术支持,为进一步通过基因敲除的方法,选择性地失活特定功能基因,进而确定这些基因在松材线虫病病理进程中的作用奠定基础.

摘要: 建立了松材线虫PCR检测标准化阳性对照及特异性强的PCR检测体系.根据松材线虫rDNA-ITS区和BxPe12基因的特异基因序列设计引物,并从中筛选出一对特异引物cqubs01/cquba01,该引物能从松材线虫特异性扩增出196bp片段,而不能对其他种类线虫进行扩增.基于优化PCR反应体系和反应程序,稳定的检测体系得以建立,检测灵敏度为100pg/μL.以松材线虫基因组DNA为模板,以上述特异引物进行PCR扩增,将纯化后的PCR产物与PMD18-T载体连接之后转入大肠杆菌中,筛选出阳性克隆进行测序验证,最终获得了松材线虫的无害化阳性对照,建立了松材线虫标准化阳性对照的PCR检测体系.对来自于不同地区的12批次近100个样品进行了实际检测验证,其结果与实际发生情况一致,说明本检测体系稳定可靠.图3表2参8

摘要: 松材线虫病是一种重要的检疫性病害,松褐天牛是传播松材线虫的主要媒介昆虫。本实验研究了温度对松褐天牛传递松材线虫数量的影响。设置22℃、28℃和34℃3个温度梯度,结果表明松褐天牛成虫的寿命随温度升高而缩短,其中雌虫寿命短于雄虫,且羽化进度不太一致,多数松褐天牛携带的松材线虫量在1000～9999条之间。通过对松褐天牛取食传入松枝的松材线虫量的追踪记录发现,随着温度升高,传播线虫的高峰时段随之提前。34℃高温下松褐天牛的传递率最低,表明高温对松材线虫病的发生具有抑制作用。